1  主题内容与适用范围  
     本标准规定了食品中溶血性链球菌的检验方法。  
     本标准适用于食品和食物中毒样品中溶血性链球的检验。  
2  引用标准  
    GB  4789.28 食品卫生微生物学检验  染色法、培养基和试剂  
3  设备和材料  
3．1  温箱：36±1℃。  
3．2  水浴：36±1℃。  
3．3  显微镜。  
3．4  离心机。  
3．5  试管架。  
3．6  灭菌平皿。  
3．7  灭菌小试管。  
3．8  载玻片。  
3．9  灭菌吸管：1 mL、10 mL。  
3．10  灭菌镊子。  
3．11  均质器。  
3．12  酒精灯。  
3．13  接种环。  
4  培养基和试剂  
4．1  葡萄糖肉浸液肉汤：按GB 4789.28 中4.1 规定，在肉浸液肉汤内加入1%葡萄糖。  
4．2  肉浸液肉汤：按GB 4789.28 中4.1 规定。  
4．3  匹克氏肉汤：按GB 4789.28 中4.62 规定。  
4．4  血琼脂平板：按GB 4789.28 中4.6 规定。  
4．5  人血浆。  
4．6  0.25%氯化钙。  
4．7  灭菌生理盐水。  
4．8  杆菌肽药敏纸片（含 0.04 单位）。  
5  检验程序 
6  操作步骤  
6．1  样品处理  
    称取 25 g 固体检样；称取25 mL 液体检样，加入 225 mL 灭菌生理盐水， 
研成匀浆制成混悬液。  
6．2  一般培养  
    将上述混悬液吸取 5 mL，接种于 50 mL 葡萄糖肉浸液肉汤；或直接划线接 
种于血平板，如检样污染严重，可同时按上述量接种匹克氏肉汤，经 36±1℃培 
养 24 h，挑起乙型溶血圆形突起的细小菌落，在血平板上分纯，然后观察溶血 
情况及革兰氏染色，并进行链激酶试验及杆菌肽敏感试验。  
6．3  形态与染色  
    本菌呈球形或卵圆形，直径 0.5～1 μm，链状排列，链长短不一，短者4～8 
个细胞组成，长者 20～30 个，链的长短常与细菌的种类及生长环境有关；液体 
培养中易呈长链；在固体培养基中常呈短链，不形成芽孢，无鞭毛，不能运动。  
6．4  培养特性  
    该菌营养要求较高，在普通培养基上生长不良，在加有血液、血清培养基中 
生长较好。溶血性链球菌在血清肉汤中生长时管底呈絮状或颗粒状沉淀。血平板 
上菌落为灰白色，半透明或不透明，表面光滑，有乳光，直径约0.5～0.75 mm， 
为圆形突起的细小菌落，乙型溶血链球菌周围有2～4 mm 界限分明、无色透明的 
溶血圈。  
6．5  链激酶试验  
     致病性乙型溶血性链球菌能产生链激酶（即溶纤维蛋白酶），此酶能激活正 
常人体血液中的血浆蛋白酶原，使成血浆蛋白酶，而后溶解纤维蛋白。  
     吸取草酸钾血浆0.2 mL，加 0.8 mL 灭菌生理盐水，混匀，再加入 18～24 h36 
±1℃培养的链球菌培养物0.5 mL 及 0.25%氯化钙0.25 mL（如氯化钙已潮解， 
可适当加大至 0.3%～0.35%），振荡摇匀，置于 36±1℃水浴中 10 min，血浆混 
合物自行凝固（凝固程序至试管倒置，内容物不流动）。然后观察凝块重新完全 
溶解的时间，完全溶解为阳性，如 24 h 后不溶解即为阴性。  
    草酸钾人血浆配制：草酸钾 0.01 g放入灭菌小试管中，再加入 5 mL人血， 
混匀，经离心沉淀，吸取上清液即为草酸钾人血浆。  
6．6  杆菌肽敏感试验  
    挑取乙型溶血性链球菌液，涂布于血平板上，用灭菌镊子夹取每片含有 0.04 
单位的杆菌肽纸片，放于上述平板上，于 36±1℃培养 18～24 h，如有抑菌带出 
现即为阳性。同时用已知阳性菌株作为对照。   
   

 

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