【原理】 原发性非典型性肺炎患者血清中常产生冷凝集素。冷凝集素是一种自身抗体,在寒冷(4℃)情况下,可与红细胞抗原起反应,一般可与O型人红细胞或自身红细胞发生凝集反应,可用于该病的辅助诊断。冷凝集反应具有可逆性,若将已凝集的红细胞再放回37℃时,凝集现象即消失。
【材料】
1、患者血清:切勿将血液放在冰箱内析出血清,在冬季室温低于-20℃时,可将标本置于37℃孵箱析出血清,随即分离进行实验。
2、人红细胞悬液:“0”型血或患者自身的抗凝血以无菌,0.9%氯化钠溶液稀释至2%。
【方法】
1、于试管架上排列小试管10支,每管内各加0.9%氯化钠溶液0.5ml。
2、加患者血清0.5ml于第1管内混匀后,吸出0.2ml加入第2管内,顺次连续稀释至第9管,混匀后弃去0.5ml。第10管不加血清作为对照。
3、每管内各加入25血细胞悬液0.2ml,振荡混合后,置冰箱内24小时或过夜。此时各管血清最终稀释度依次为1:4,1:8,1;16,1:32,1:64,1:128,1;256,1:512,1;1024
【结果】
1、冷凝集有可逆性,在较暖的室温中,凝集现象迅速消失,故在冰箱内取出试管后,应立即观察结果。
2、取出时尽量避免震动,先观察管底红细胞沉淀形状,再轻摇试管,如有明显的凝集现象,记录凝集效价。
3、对照管内的红细胞,轻摇后应完全分开,无凝集现象。
4、如遇阳性结果,最好将试管再放入37℃水浴箱内5—30分钟,重新观察一次,如红细胞完全分散,凝块消失,则证实为真正的冷凝集现象,否则可能由于其他凝集素所致,不作阳性报告。
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