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形态及菌落观察



录入时间:2008-12-3 14:44:35 来源:青岛银河澳门官网入口

【原理】  支原体形态多为球形小颗粒和较短的丝状体,不易鉴别。 
    溶脲脲原体(Uu)在含95%氮气和5%二氧化碳环境中生长良好。其生长最适pH为5.5—6.5,最适温度为36—37℃。Uu具有脲酶,能分糖尿素产氨,使含酚红指示剂的Uu液体培养液pH上升,颜色由黄色变为红色。再将液体培养物转种到Uu固体培养液上,能生长成具特征性荷包蛋样菌落。 
1、液体培养液支原体肉汤培养液80ml,马血清或小牛血清10ml,酵母浸液10ml,10%尿素溶液0.5—1.5ml,0.4%酚红溶液0.5ml,青霉素(使其在培养液中的浓度为500—2000U/ml)用1mol/l氯化氢调pH至5.5—6.5,用小试管分装后置冰箱中备用,每管1.52.0ml。接种标本后,经孵育,若培养液发生由黄变红的颜色变化,透明无混浊(有别于某些细菌及真菌生长)则可初步判断为有支原体生长。大多数Uu在24小时内可获得阳性结果。 
2、固体培养液在200ml支原体肉汤培养液中,加入琼脂1.2—1.4g,高压灭菌后冷却到50℃左右,逐一加人上述添加剂。摇匀,倒人无菌平皿中,待凝固后,置冰箱中备用。Uu在固体培养液上菌落核心呈粗颗粒状,具极窄的边,有时呈荷包蛋样。 
    人型支原体(Mh)在有氧及无氧环境中均能生长,在液体培养液中2—3日可见生长,固体培养液上培养4—5日即可生出菌落。生长条件除需胆固醇外,尚需要精氨酸。生长的最适pH为7.0,最适温度36—37℃,Mh具有精氨酸脱氢酶,能水解精氨酸产氨,使含酚红指示剂的Mh液体培养液pH值上升,呈碱性,颜色由橙黄色变为红色。Mh和Uu一样,不发酵葡萄糖,这与生殖支原体有区别。将液体培养物转种到固体培养液上,能生长成具有特征性的荷包蛋样菌集落。培养液中不加尿素,需加入精氨酸,其他营养成分与Uu相同。观察结果同Uu。 
    生殖支原体(Mg)能发酵葡萄糖和其他碳水化合物,使培养液pH下降呈酸性,可使含酚红指示剂的培养液出现由红色变为黄色的变化,但即使降至6.0以下,Mg仍可存活。Mg不能分糖精氨酸及尿素。它营养要求复杂,须在不含醋酸铊的SP-4培养液中才能生长,而且生长极缓慢。Mg在固体培养液上,置于含5%—10%二氧化碳和90%—95%的氮环境中,可形成荷包蛋样集落。 
    肺炎支原体(Mp)以牛心消化液为基础,加20%小牛血清及新鲜酵母浸液制成的液体或固体培养液。加入青霉素,可防止杂菌生长。初次分离生长缓慢,在含5%二氧化碳下培养,10天长出荷包蛋状菌落。能发酵葡萄糖产酸,不能利用精氨酸与尿素,可还原美蓝,分离培养阳性率不高。 
【材料】以溶脲脲原体为例。 
1、支原体固体培养液。 
2、溶脲脲原体固体培养液。 
3、姬姆萨染色液。 
【方法】 
1、标本采集女性:用扩阴器扩阴后,以无菌拭子取宫颈口分泌物,也可以取羊水,不推荐用尿液;男性:以无菌拭子取尿道分泌物、前列腺按摩液、精液或中段尿培养(中段尿10ml经2000r/min离心10分钟),取沉渣接种。 
2、接种好的培养液,置于35—37℃含5%—10%二氧化碳培养2—3天,每天观察结果。 
3、菌落染色镜检。 
(1)用低倍镜在平板上选择一个菌落,用刀片切下带菌落的琼脂块,置于一载玻片上,菌落面朝下。 
(2)将载玻片放入80—85℃的水中,见琼脂发白脱落后取出玻片。 
(3)自然干燥,姬姆萨染色(染液作1;20稀释,需染3小时以上)。 
【结果】  经过培养,标本阳性时,培养液呈红色,低倍镜下姬姆萨染色观察,可见菌落被染成蓝色,中央深、四周较浅,形状似荷包蛋样。   
   

 

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