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钩端螺旋体的分离培养



录入时间:2008-12-3 14:37:44 来源:青岛银河澳门官网入口

  钩端螺旋体可以进行人工培养,但其生长要求较高,需用含8%—10%兔血清的Korthof培养液,血清在其中所起的作用,一方面是提供钩端螺旋体生长所需的生长因子,另一方面可以中和钩端螺旋体的代谢产物,有利于钩端螺旋体的生长。 
【材料】Korthof培养液,待检标本(患者血液、尿液或可疑动物的内脏) 
【方法】 
1、患者血液培养采集早期患者血液,无菌操作接种于2—3管Korthof培养管中,每管接种1—3滴。血培养管置28℃培养。每隔5—7天取培养物暗视野显微镜下观察有无钩端螺旋体生长,若有生长,即为分离阳性。若未见生长,需继续培养60天,仍不见钩端螺旋体方作阴性处理。 
2、患者尿液培养:留取病后两周以上的患者中段尿30—50ml于无菌离心管中3500—4000r/min离心1小时。取沉渣0.3—0.5ml接种于2—4管上述培养液中,28℃孵育。每隔5—7天取材镜检。为提高检出率和减少污染,可在采集尿标本的前一天晚上给患者服用碳酸氢钠2—4g,同时,在培养液中加入100—400ug/ml5-氟尿嘧啶或1/2000的磺胺嘧啶。 
3、动物肾脏培养无菌操作,采集新鲜动物肾脏(包膜完整),剪取米粒大小接种于2—3管Korthof培养管中,置28℃培养。每隔5—7天取培养物置暗视野显微镜下观察有无钩端螺旋体生长,若有生长,即为分离阳性。若未见生长,需继续培养60天,仍不见钩端螺旋体生长方作阴性处理。 
4、菌株分群、分型应用分群血清与新分离的钩端螺旋体作凝集实验,确定菌群。应用交叉凝集素吸收实验或分型因子血清来确定菌型。    
   

 

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