涂片染色能查到结核分枝杆菌者,一般需要每毫升痰液内含菌量至少500个以上,甚至需达到5万以上,所以结核患者痰标本直接涂片染色阳性率很低,经浓缩集菌后再进行染色镜检可显著提高检测的阳性率。
【材料】 结核患者24小时痰液,细口瓶,0.02%酚红液、汽油或二甲苯,0.5%或4%氢氧化钠,无菌0.9%氯化钠溶液等。
【方法】
一、漂浮法
1、取24小时痰液15ml,装入细口瓶内,加人2倍量0.5%氢氧化钠摇匀,高压灭菌或煮沸20—30分钟杀菌。
2、待冷后加人汽油或二甲苯2ml,用力振荡20—30分钟,用0.9%氯化钠溶液加至液面与瓶口齐,静置半小时。
3、取瓶口表面油状物涂于载玻片上,微微加热,干后再加,如此重复5—6次,至厚度适宜,烘干待冷,抗酸染色后镜检。
二、沉淀法
1、取痰液1份与2倍量4%氢氧化钠混合,高压灭菌或煮沸20—30分钟后,加入0.02%酚红指示剂0.1ml,剧烈振荡混匀,亦可置37℃水浴消化30分钟。
2、校正pH为7.0,3000r/min离心30分钟,弃去上清液。
3、取沉淀物涂片染色镜检。若进行分离培养和动物接种,则应免去高压灭菌或煮沸的程序。
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