临床标本结核分枝杆菌检查主要有直接涂片抗酸染色、细菌培养、聚合酶链反应(PCR)、抗体检测、动物接种等多种方法。直接涂片法即取患者标本直接涂片抗酸染色后镜检,此法简便迅速,但要求标本中结核分枝杆菌量多,并要注意与非结核分枝杆菌区别。开放性肺结核患者的痰中常含有结核分枝杆菌,如取痰液直接涂片、染色镜检找到抗酸杆菌,可作初步诊断。
【材料】痰标本、载玻片、石炭酸复红染色液、3%盐酸乙醇、美蓝染色液、金胺染色液、0.5%氢氧化钠。
【方法】
直接染色法
1、收集患者清晨咳痰,用接种环挑取痰液中干酪样坏死小块或带血小块,制成厚涂片,干燥后火焰固定。
2、用过的接种环须用75%乙醇充分清洗,或放入沸水中煮沸数分钟,将接种环上的细菌杀死,然后方可在乙醇灯上进行烧灼灭菌;或者先将接种环置乙醇灯火焰旁烘烤片刻,再置于外焰中烧灼灭菌,严禁将取标本后的接种环直接放在火焰上灭菌,以防止痰液受热后突然炸裂,使尚未死亡的结核分枝杆菌随之播散。
3、将制好的涂片进行抗酸染色或金胺染色。
4、染色后将涂片置油镜下或荧光显微镜下观察,注意观察形态、排列方式及染色性。
浓缩集菌法
【报告方式】
1、直接涂片法的报告方式
-:仔细观察300个视野(观察时间不少于4分钟)未发现抗酸杆菌。
+ -:100个视野内发现1—2个抗酸杆菌。
+:100个视野内发现3—9个抗酸杆菌。
+ +:100个视野内发现10—99个抗酸杆菌。
+ + +:每个视野内发现1—9个抗酸杆菌。
+ + + =:每个视野内发现10个以上抗酸杆菌。
2\集菌涂片应按“发现抗酸杆菌”或“未发现抗酸杆菌”方式报告。
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