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抗生素微生物检定——管碟法 1



录入时间:2008-12-1 16:52:02 来源:青岛银河澳门官网入口

  抗生素微生物检定系在适宜条件下,根据量反应平行线原理设计,通过检测抗生素对微生物的抑制作用,计算抗生素活性(效价)的方法。它包括两种方法,管碟法和浊度法。 
  测定结果经计算所得的效价,如低于估计效价的90%或高于估计效价的1105时,应调整其估计效价,重新试验。除另有规定外,本法的可信限率不得大于5%。 
  管蝶法系利用抗生素在琼脂培养基内的扩散作用,比较标准品与供试品两者对接种的试验菌产生抑菌圈的大小,测定供试品效价的一种方法。 
1、菌悬液的制备 
(1)枯草芽孢杆菌悬液取枯草芽孢杆菌的营养琼脂斜面培养物,接种于盛有营养琼脂培养基的培养瓶中,在35—37℃培养7d,用革兰染色法涂片镜检,应有芽孢85%以上。用灭菌水将芽孢洗下,在65℃加热30min,备用。 
(2)短小芽孢杆菌悬液取短小芽孢杆菌的营养琼脂斜面培养物,照上述方法制备。 
(3)金黄色葡萄球菌悬液:取金黄色葡萄球菌的营养琼脂斜面培养物,接种于营养琼脂斜面上,在35—37℃培养20—22h。临用时,用灭菌水或0.9%灭菌氯化钠溶液将菌苔洗下,备用。 
(4)藤黄微球菌悬液取藤黄微球菌的营养琼脂斜面培养物,接种于盛有营养琼脂培养基的培养瓶中,在26—27℃培养24h,或采用适当方法制备的菌斜面,用培养基III或0.9%灭菌氯化钠溶液将菌苔洗下,备用。 
(5)大肠埃希菌悬液取大肠埃希菌的营养琼脂斜面培养物,接种于营养琼脂斜面上,在35—37℃培养20—22h。临用时,用灭菌水将菌苔洗下,备用。 
(6)啤酒酵母菌悬液取啤酒酵母菌V的号培养基琼脂斜面培养物,接种于IV号培养基琼脂斜面上。在32—35℃培养24h,用灭菌水将菌苔洗下置含有灭菌玻璃珠的试管中,振摇均匀,备用。 
(7)肺炎克雷伯菌悬液取肺炎克雷伯菌的营养琼脂斜面培养物,接种于营养琼脂斜面上,在35—37℃培养20—22h。临用时,用灭菌水将菌苔洗下,备用。 
(8)支气管炎博特菌悬液取支气管炎博特菌的营养琼脂斜面培养物,接种于营养琼脂斜面上,在32—35℃培养24h。临用时,用灭菌水将菌苔洗下,备用。 
2、标准品溶液的制备标准品的使用和保存,应照标准品说明书的规定。 
   供试品溶液的制备:精密称(或量)取供试品适量,用各药品项下规定的溶剂溶解后,再按估计效价或标示量的规定稀释至与标准品相当的浓度。 
3、双碟的制备取直径约90mm,高16—17mm的平底双碟,分别注入加热融化的培养基20ml,使在碟底 内均匀摊布,放置水平面上使凝固,作为底层。另取培养基适量加热融化后,放冷至48—50℃(芽孢可至60℃),加入规定的试验菌悬液适量(能得清晰的抑菌圈为度。二剂量法标准品溶液的高浓度所致的抑菌圈直径在18—22mm,三剂量法标准品溶液的中心浓度所致的抑菌圈直径在15—18mm),摇匀,在每一双碟中分别加入5ml,使在底层上均匀摊布,作为菌层。放置在水平台上冷却后,在每一双碟中以等距离均匀安置不锈钢小管(内径6.0mm士0.1mm,高10.0mm士0.1mm,外径7.8mm士0.1mm)4个(二剂量法)或6个(三剂量法),用陶瓦圆盖覆盖备用。 
4、检定法 
(1)二剂量法取照上述方法制备的双碟不得少于4个,在每一双碟中对角的2个不锈钢小管中分别滴装高浓度及低浓度的标准品溶液,其余2个小管中分别滴装相应的高低两种浓度的供试品溶液;高、低浓度的剂距为2:1或4:1。在规定条件下培养后,测量各个抑菌圈直径(或面积),照生物检定统计法中的法进行可靠性测验及效价计算。 
(2)三剂量法取照上述方法制备的双碟不得少于6个,在每一双碟中间隔的3个不锈钢小管中分别滴装高浓度(S3)、中浓度(S2)及低浓度(S1)的标准品溶液,其余3个小管中分别滴装相应的高、中、低3种浓度的供试品溶液;高、低浓度的剂距为1:0.8。在规定条件下培养后,测量各个抑菌圈直径(或面积 ),照生物检定统计法中的(3.3)法进行可靠性测验及效价计算。   
   

 

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