凡是对微生物学检测方法验证实验产生重大影响的因素，都是在设计验证方案时需要关注的关键因素。这些关键因素通常主要是由以下因素构成：①验证实验所用微生物的种类及其生理特性；②验证用微生物接种液的制备；③验证样品的预处理方法；以及所有验证实验的检验方法、检验条件和培养条件。因此这些因素也正是影响样品验证结果可靠性的关键要点。 
   众所周知，微生物种类类群繁多，不同种类的微生物其生理生化特性也各不相同。用于验证的微生物首先要考虑是否具有广泛代表性，至少包括G+菌、G-菌、酵母菌和霉菌这四类微生物。这几类微生物基本涵盖了样品中可能存在的各类微生物；另一方面，它们也基本包含了在防腐抑菌效果检验试验中所要使用的试验菌株。在对控制菌或致病菌的检查方法进行验证时，则要求采用与被检微生物相同的标准菌株作为验证微生物，这样针对性与效果会更好。此外，根据验证实验的目的，可能还要增加一些在特定环境分离到的菌株用于环境监测方法或无菌检查方法的验证。 
   《中国药典》（2005年版）规定的验证用菌株有：大肠埃希菌，金黄色葡萄球菌，乙型副伤寒沙门菌，白色念珠菌，黑曲霉、铜绿假单胞菌，枯草芽孢杆菌，生孢梭菌。 
 另外，微生物生理生化状态与制备和培养条件有密切关系，而这些生理生化状态又直接影响到微生物试验结果。因为微生物在生长不同时期（如对数期）的营养细胞和衰老细胞、或芽孢的生理生化状态是不同的，我们试验研究的是群体细胞，而不可能仅是单个的细胞，只有群体细胞均匀，生理生化特性趋于一致，实验结果才会稳定。因此，无论是用于微生物验证、防腐效力测试或消毒效果检查的验证菌株，还是用于常规试验用的阳性对照菌、培养基灵敏度检查用的试验菌，它们的培养基、储存条件要按既定的标准操作规程进行，制备均匀一致的营养细胞或芽孢，以确保各代微生物营养细胞或芽孢的生理生化状态保持稳定一致，特征趋于一致。因此选用的试验菌株应至少包含G+菌、G-菌、酵母菌和霉菌这四大微生物，同时确定选用营养细胞还是芽孢。   
   

 

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