1、原理
利用电子显微镜的超级放大功能,可直接观察培养细胞中支原体污染情况。
2、操怍方法
①细胞传代至贴有盖玻片的平皿中;②培养24h取出;③PSB洗涤;④2.5%戊二醛/ PSB固定15min,PSB洗涤;⑤1%锇酸固定30min,PSB洗涤;⑥乙酸异戊酯脱水;⑦冰点干燥;⑧喷金;⑨扫描电镜观察,照相
综上所述,几种不同的方法各有特点,其应用也各有侧重。①支原体培养法是最为经济和可靠的方法,但其实验周期较长,所以常用于进行对怀疑细胞的最后甄别。②DNA染色法较为快捷,方法简单,但其灵敏度有一定欠缺,易造成漏检。③PCR检测支原体的方法最为快速、灵敏,取样量少,既可进行细胞检测也可进行细胞上清的检测,同时可以检测8种支原体的污染,是目前常用的检测手段。但其成本较高,条件要求严格,有时易出现假阳性。其弥补的方法是对怀疑的样品经过3次PCR检测,或用培养法检测。④电镜法非常直观、准确,但对使用环境要求高,操作复杂,实验周期较长,常作为样品的最后定性检测。
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