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支原体分型试验



录入时间:2008-11-24 15:51:38 来源:青岛银河澳门官网入口

1、材料 
Dienes染色液,1.5%毛地黄皂苷液。 
2、方法 
(1)Dienes菌落染色:Dienes染色液是将2.5g亚甲蓝、1.5g天青II、10g麦芽糖、0.5g碳酸钠溶于100ml蒸馏水中。染色时直接吸入染色液覆盖菌落上1min左右,用生理盐水洗去染色液后,在低倍显微镜下可见支原体菌落成蓝色,其他细菌菌落不着色,容易鉴别。 
(2)毛地黄皂苷敏感性试验:用95%酒精配制1.5%毛地黄皂苷液,56℃水浴加热使完全溶解。然后将此溶液浸湿灭菌的小圆滤纸。37℃使干燥,置冰箱保存使用。将待检支原体菌液涂种于固体培养基上,再将上述毛地黄皂苷纸片放于接种培养基上,培养3—5d后,低倍镜下观察菌落生长情况。若有抑制带出现,带宽>2mm的为支原体,带宽<2mm为无甾醇原体。 
(3)生化反应试验:常利用发酵葡萄糖、水解精氨酸、水解尿素等生化反应鉴别支原体。 
                          表  人类支原体的生化反应 
支原体          是否需要    分解    水解       水解      还原      吸附 
                 胆固醇    葡萄糖   精氨酸     尿索     四氮唑    血细胞 
发酵支原体          +         +       +        —        —          — 
肺炎支原体          +         +       —        —       —          — 
溶脲脲原体          +         —      —         +       —         +
人型支原体          +         —       +        —       —        — 
生殖支原体          +         +       —        —       —         +
唾液支原体          +         —        +        —       —        —
口腔支原体          +         +        +         —       —        —
穿通支原体          +         +        +         —        —       + 
(4)血细胞吸附试验:在平板琼脂培养基上生长的支原体菌落滴上豚鼠红细胞悬液,人体的某些支原体有吸附作用。 
(5)生长抑制试验:用直径6—8mm的圆形灭菌滤纸片,用未经稀释的抗血清湿透后,放入无菌平板内,于4℃下干燥待用。吸取待检菌株的菌液0.5ml涂布于固体培养基上,放置37℃使琼脂表面稍干燥 。无菌操作夹取抗血清纸片贴于琼脂表面,37℃培养4—5d。在低倍镜下观察,当滤纸片周围无菌落生长,出现抑菌圈大于2mm者表示该菌与抗血清的免疫原同一菌种,小于2mm为异种。试验时应该设立阴性对照组和阳性对照组。   
   

 

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