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分离培养技术的材料与方法



录入时间:2008-11-24 15:50:12 来源:青岛银河澳门官网入口

   
1、材料 
(1)培养基:培养支原体用培养基。
(2)器材及试剂:L玻棒、马血清、抑菌剂。 
2、方法 
(1)标本的采集;支原体常侵及人和动物的黏膜表面,可用灭菌棉拭子取分泌物接种于2—3ml支原体液体培养基的小管中。若标本是组织块,可在灭菌乳钵或玻璃匀浆器中研成乳浆后接种。取样后应尽快接种培养。 
分离培养:接种固体培养基时转动拭子使标本液体尽量挤出,用无菌毛细吸管吸取标本1—2滴约0.2ml接种于平板固体培养基上,用L玻捧涂抹使液体标本分布均匀,放在5%—10%CO2环境中37℃培育,3—5d后观察结果。接种半固体培养基或液体培养基时,接种前半固体培养基在水浴中煮沸至完全融化后,待冷却至50℃左右加入马血清、抑菌剂等,摇动使均匀,并待培养基冷至37℃左右,用无菌吸管接种标本0.5ml于培养基中,摇匀后盖以灭菌胶塞,37℃培育,观察支原体菌落。液体培养基也如上接种。若有支原体生长,培养基即出现颜色变化。 
(2)菌种的纯化:在平板固体培养基上用放大镜或低倍显微镜下可见“油煎蛋”状的典型支原体菌落,可用灭菌小刀切取菌落琼脂块,移入液体或半固体中压碎琼脂块进行培养,盖上胶塞,放37℃。待支原体生长、繁殖,培养基变红或变黄时,用液体培养基稀释培养物至10(-4),10(-5),取0.2—0.3ml接种于平板固体培养基上。如上处理,反复分离纯化2—3次,即可得支原体纯种,保存作鉴定试验之用。 

 

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