1、材料
(1)标本:脑脊液、痰、脓、尿、活体组织及人体解剖材料等。
(2)试剂:墨汁、沙氏固体培养基、小白鼠。
2、方法
(1)标本采集:采集脑脊液、痰、脓、尿、活体组织及人体解剖材料等。
(2)直接检查:将样品经墨汁染色后镜检,查看有无圆形或卵圆形的芽生孢子,孢子外面有一肥厚的荚膜,荚膜比菌体可大1—3倍。出芽可为单芽,也可为多芽,孢子内可见有一个较大反光颗粒(脂质颗粒)和许多小颗粒。
(3)培养检查:将样品接种在沙氏固体培养基上,置25—37℃培养均可生长,24—48h形成酵母样菌落,少数菌株生长缓慢,至少要培养2—3周才能形成菌落,菌落呈不规则圆形。开始时为白色,透明发亮,表面光滑凸起,为酵母型菌落,日久菌落增厚,表面黏稠。颜色由乳 白、奶油色转为橘黄色。镜检可见有许多芽生细胞,有时也可见到芽管。
(4)进一步鉴定可做以下试验:酚氧化酶试验、尿素酶试验、糖同化及发酵试验、PCR检测等。
(5)鉴定有无致病性:把分离到的细菌制成悬液,给小白鼠腹腔注射(0.5ml/只 )或脑内注射(0.02ml/l只),观察有无发病死亡的情况。有致病性的新型隐球菌一般于接种小鼠后2—3周内小鼠死亡。
(6)血清学试验:脑脊液和血清可用于检测抗原或抗体,常用乳胶凝集试验。但在治疗收效后,抗原滴度可下降。抗体能凝集隐球菌的酵母细胞或表层上附着的抗原颗粒。
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