真菌的一般检验法为直接镜检观察是否有菌丝、孢子或菌体,检出循环抗原等。直接镜检对真菌病诊断很重要,尤其对威胁生命的真菌病,快速、准确的非培养诊断法是非常必要的。
不染色标本直接镜检除部分深部感染真菌可初步确定菌种外,大部分浅部感染真菌仅能确定真菌菌丝和有无孢子,很难确定为何种真菌感染。
1、材料
①标本。甲屑、皮屑、毛发等固体标本;脓汁、尿沉渣、分泌物等液体标本。
②试剂。100g/lNaOH或KOH溶液;生理盐水。
③其他。小镊子、盖玻片、载玻片。
方法
(1)制片方法将甲屑、皮屑、毛发等 固体标本置灭菌洁净载玻片上,加一滴封固剂(100g/lNaOH或KOH溶液),盖上盖玻片,微加热使角质软化,轻压盖玻片,使标本变薄、透明,并驱除气泡。脓汁、尿沉渣、分泌物等标本仅用无菌生理盐水稀释即可。
(2)检验方法:先用低倍显微镜检查,当查到可疑为真菌孢子或菌丝时,再换高倍镜检查,观察记录菌丝和孢子。许多标本不需染色即可直接镜检。如观察分生孢子的发育需放大1000倍。有些结构如分生孢子梗上产生的瓶梗需用相差显微镜才看得清楚。某些病原性真菌如荚膜组织胞浆菌、皮炎芽生菌、粗球孢子菌感染病人标本中,直接检出与这些病原菌形态特征符合的真菌时,结合临床表现容易作出明确诊断。如果检出的是正常菌群,要确定其病原性比较困难。在酸中毒的糖尿病病人暴发急性感染时,如检出宽或波形不分隔的菌丝则应考虑毛霉菌病。直接检出的结果也有助于实验室进一步诊断,有助于采取恰当的检验步骤和措施(如选择特殊的培养基和确定适宜的孵育时间)。但是,直接检查也有其局限性,因为阴性结果也不能排除真菌感染,直接检查不如培养法敏感,其敏感性也随标本类型、数量、采集时间和质量等而有不同;也有假阳性结果,溶解的淋巴细胞在脑脊液印度墨汁湿片中易误认为新型隐球菌;脂肪微滴也可能与出芽酵母细胞混淆。出现可疑结果时应进行复查,或采用其他检验步骤。除花斑癣病原菌培养有困难只能依据直接镜检诊断外,一般标本应进一步作培养检查。
上一篇:真菌的分类系统
下一篇:真菌的鉴别方法