许多情况下,病毒颗粒与标本中其他颗粒混杂在一起,很难分辨形态。免疫电镜技术是借助抗血清与病毒颗粒特异性结合,包被病毒使之凝聚加以区别。可以观察病毒含量较少的标本是其优点。
1、原理
标本中的病毒与稀释的血清中抗体结合形成抗原一抗体复合物,电镜观察。
2、材料
①20g/l磷钨酸(PTA)。用双蒸馏水配制20g/l磷钨酸溶液,用1mol/lNaOH校正pH值为6.8。
②涂有炭及聚乙烯醇缩 甲醛的铜网。
③病毒相应抗血清。
④平皿、滤纸、游丝镊子、微量毛细管,10g/l琼脂凝胶块,蜡皈。
3、操作方法
①取0.9ml病毒悬液,加入0.1ml稀释的病毒相应血清,37℃30min,充分反应。
②取10g/l琼脂凝胶块,下面垫三层普通滤纸,将一滴抗原-抗体复合物悬滴在琼脂凝胶块上,将涂膜的铜网扣在悬滴表面使之漂浮。
③在悬滴未被吸干之前取下铜网,倒转在蜡板上,立即滴加磷钨酸染液染色1min,用滤纸毛边吸干多余染液,电镜观察。
4、结果
显示病毒形态、结构。
5、注意事项
注意掌握抗原、抗体比例,比例适当方可形成大小合适的抗原 ; 抗体复合物。
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