(1)实验原理:流感病毒表面的血凝素能与人的“O”型红细胞、豚鼠和鸡的红细胞上的血凝素受体结合,引起红细胞凝集。
(2)实验材料
①流感病毒的尿囊腔培养液或羊膜腔的羊水培养液。
②病人血清、0.5%鸡红细胞悬液。
③流感病毒型与亚型免疫血清。
④试管架、无菌小试管、无菌生理盐水、毛细滴管。
(3)实验方法
①取小试管9支,第1管加生理盐水0.1ml,其他各管均加0.5ml。
②取收获的尿囊液0.1ml,加入第1管中作1:10稀释,混匀后吸取0.5ml(1:10稀释)加至第2管混匀,混匀后从第2管中吸取0.5ml置第3管混匀……依次作倍比稀释至第8管,混匀后从第8管中取出0.5ml弃去。这样各管的液体量均为0.5ml,从第1管至第8管的尿液稀释度为1:10,1:20…1:1280,第9管为生理盐水对照管。
③稀释完毕后每管加入0.5%鸡红细胞悬液0.5ml. 混匀,室温放置30—45min,立即观察结果,观察时轻拿、勿摇。
(4)结果判定各管出现鸡红细胞凝集程度 以“++++”、“+++”、“++”、“+”、“—”表示,以出现“++”病毒的最高稀释度为血凝效价。
++++:鸡红细胞全部凝集成块状,凝集的红细胞铺满管底。
+++:大部分鸡红细胞凝集,在管底铺成薄膜状,但有少数红细胞不凝,在管底中心形成小红点。
++ :约有半数鸡红细胞凝集,在管底铺成薄膜,面积较小,不凝集的红细胞在管底中心形成小圆点。
+:只有少数鸡红细胞凝集,不凝集的红细胞在管底聚成小圆点,凝集的红细胞在小圆点周围。
—:不凝集。鸡红细胞沉于管底,呈一边缘整齐的致密圆点。
按上述结果举例的流感病毒的血凝效价为1:320,即病毒液稀释至1:320时,每0.5ml中含1个血凝单位。若配4个血凝单位,病毒液应稀释成1:80。
如果血凝试验阳性,应该进一步做血凝抑制试验鉴定该病毒的型甚至亚型。
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