(1)实验材料
①染色液。石炭酸复红液、碱性美蓝溶液、3%盐酸酒精。
②菌种。含结核分枝杆菌的痰标本。
③其他。普通玻片、酒精灯、接种环及显微镜等。
(2)实验方法
①涂片
a、直接涂片和厚膜涂片。用接种环挑取约0.01ml脓性或呈干酪样部分痰液,制成10mm*10mm大小的均匀薄涂片,或取上述标本约0.1ml,制成20mm*15mm大小的厚膜涂片。自然干燥,火焰固定后,行抗酸染色或金胺“0”荧光染色,镜检。
b、集菌涂片。І、沉淀集菌法。取痰液2—3ml,40g/lNaOH1—2倍量混匀。经103.43Pa高压灭菌20—25min(或煮30min),3000r/min离心30min,弃上清液,取沉淀物涂片做抗酸染色或金胺“0”荧光染色镜检;П、漂浮集菌法。取晨痰2—3ml放入100ml三角瓶内,加1—2倍量40g/lNaOH溶液,经103.43Pa高压灭菌20—25min(或煮30min)。冷却后滴加汽油0.3ml,瓶口盖玻璃纸加塞,塞紧瓶口,置振荡器或手摇振荡10min,再加蒸馏水至满瓶口而又不外溢,静置10—15min,将已编号的洁净载玻片盖在瓶口上,静置15—20min,取下载玻片并迅速将载玻片翻转至浸膜向上,或用接种环取瓶口液面物涂于载玻片上,自然干燥,火焰固定后做抗酸染色或金胺“0”荧光染色,镜检。
②染色
a、初染,在已固定的结核分枝杆菌痰标本涂片上放一小块滤纸片,之后滴加数滴石炭酸复红液后,将标本片放在火焰高处徐徐加温,当涂片上液体出现蒸汽时离开火焰(切不可煮沸),待玻片稍冷却后补充染液(以防干燥或玻片断裂 ),如此维持染色3—5min,待玻片冷却后用水冲洗,甩干。
b、脱色,在涂片上滴加数滴3%盐酸酒精,轻轻晃动玻片,直至无红色液体流下为止,一般作用1—3min,水洗,甩干。
c、复染,滴加数滴碱性美蓝液于涂片上,作用1min后,水洗,甩干。用吸水纸印干标本片或 自然干燥后油镜检查。
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