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细菌染色标本检查法—革兰染色法



录入时间:2008-11-14 15:02:49 来源:青岛银河澳门官网入口

   
    细菌标本经染色后,与周围环境在颜色上形成鲜明的对比,可在普通光学显微镜下观察细菌的形态特征。 
1、实验材料 
(1)染色液结晶紫溶液、卢戈碘液、95%酒精、稀释石炭酸复红液。 
(2)菌种大肠杆菌和葡萄球菌6—12h肉汤混合培养物。 
(3)其他普通玻片、酒精灯、接种环等。 
2、实验方法 
(1)细菌标本片制备 
①涂片。取一张洁净载玻片,将变形杆菌液体培养物直接涂布于载玻片上;或先在载玻片上放置一接种环生理盐水,再取固体培养基上少许葡萄球菌与生理盐水磨匀,涂成直径1cm大小的区域。取菌量不可太多,使盐水磨成灰白色为宜。 
②干燥 。涂片最好在室温下自然干燥,或将标本面向上,置于酒精灯火焰高处慢慢烘干,切不可放在火焰上烧干。 
③固定。干燥后的标本片迅速通过火焰3次,既可达到杀菌的目的,又能固定细菌在玻片上,以免玻片上细菌在染色中被冲洗掉。 
(2)染色 
①初染。滴加结晶紫液2—3滴于涂片上,作用1min后,用细流水冲洗,甩干。 
②媒染。滴加卢戈碘液数滴于涂片上,作用1min后用流水冲洗,甩干。 
③脱色。滴加95%酒精数滴,轻轻晃动玻片,使玻片上流下的酒精液无紫色为止(时间灵活掌握,大约0.5min左右),用流水冲洗,甩干。 
④复染。滴加稀释石炭酸复红液数滴,作用1min后,用流水冲洗,甩干。最后用吸水纸印干标本片或 自然干燥后,玻片上滴加镜油,用显微镜油镜观察。 
3、实验结果 
   葡萄球菌最后被染成紫色,呈葡萄状排列;变形杆菌被染成红色,单个散在分布。 
4、影响因素 
(1)操作因素涂片太厚或太薄,菌体分散不均匀,可影响染色结果。固定时避免菌体过分受热。脱色时间要根据涂片厚薄灵活掌握。 
(2)染液因素:所有染液应防止水分蒸发而影响浓度,特别是卢戈碘液久存或受光作用后易失去媒染作用。脱色酒精以95%浓度为宜,若瓶密封不良或涂片上积水过多,可使酒精浓度下降而影响其脱色能力。
(3)细菌因素:不同时间培养物,革兰染色结果有差异,如葡萄球菌幼龄菌染成紫色,而老龄菌可被染成红色。细菌染色时一般用18—24h的细菌培养物为宜。

 

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