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一、培养基用途：
用于蜡样芽孢杆菌选择性増菌培养。
二、培养基成分：
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成分 |
含量（g/L） |
|
胰酪胨 |
17.0 |
|
植物胨 |
3.0 |
|
氯化钠 |
5.0 |
|
磷酸氢二钾 |
2.5 |
|
葡萄糖 |
2.5 |
|
pH 7.3±0.1 25℃ |
|
三、原理：
胰酪胨、植物胨提供氮源，维生素和生长因子；葡萄糖提供碳源；磷酸二氢钾为缓冲剂；氯化钠维持渗透压，添加的抗生素多粘菌素B（2.25万单位）主要可抑制革兰氏阴性菌的生长。
四、操作方法
1、称取本品30.0g，加热溶解于1000ml蒸馏水中，分装至每瓶225ml，121℃高压灭菌15min，冷却至50℃左右时，添加1支多粘菌素B（2.25万单位），摇晃均匀后，分装试管。
2、制备工作菌悬液。
3、接种。
目标菌（蜡样芽孢杆菌CMCC(B) 63303）：接种10CFU-100CFU/管，接种体积不超过1mL，接种两个平型管。同时将1mL菌悬液（与试管同一稀释度）倾注平板（或适宜稀释度0.1mL涂布平板）接种两个平板，做接种量计数用。
非目标菌（大肠埃希氏菌ATCC 25922）：接种1000CFU-5000CFU/管，接种体积不超过1mL，接种两个平型管。同时将1mL菌悬液（比待测培养基试管接种小10-100倍稀释度）倾注平板（或适宜稀释度0.1mL涂布平板）接种两个平板，做接种量计数用。
接种后30±1℃培养24±2小时。
图一： 胰酪胨大豆多粘菌素肉汤基础30℃培养24小时后
30±1℃培养24±2小时后转接平板。
目标菌（蜡样芽孢杆菌CMCC(B) 63303）：吸取10ul培养液均匀涂布或螺旋涂布到MYP平板。
非目标菌（大肠埃希氏菌ATCC 25922）：吸取10ul培养液均匀涂布或螺旋涂布到非选择性平板上（如：TSA）。
4、将转接后的平板置于30±1℃培养24-48小时。
图二：试管转接平板后试验现象
五、实验结果
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质控菌株 |
菌株编号 |
接种量（CFU） |
质量评定标准 |
特征性反应 |
|
蜡样芽孢杆菌 |
CMCC(B) 63303 |
10-100 |
在MYP上>10CFU |
菌落为微粉红色，周围有淡粉红色沉淀环 |
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大肠埃希氏菌 |
ATCC 25922 |
1000-5000 |
在TSA上<100CFU |
/ |
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