一、试验原理：

  本产品符合GB 4789.28-2024 《食品安全国家标准 食品微生物学检验 培养基和试剂的质量要求》。

  胰胨、多价胨和酵母膏提供氮源、维生素和生长因子；李斯特氏菌可耐受较高含量的氯化钠，同时对部分杂菌起抑制作用；磷酸二氢钾和磷酸氢二钠为缓冲剂；七叶苷为可发酵的糖类；萘啶酮酸和吖啶黄为选择性抑菌剂，抑制非李斯特氏菌的生长。

二、培养基配方（g/L）：

三、试验方法：

  粉体装培养基的使用：

  1. 称取本品49.4g， 加热搅拌溶解于1000ml蒸馏水中，分装， 121℃高压灭菌15分钟，冷却后备用。LB1液：每225ml培养基中加入1支萘啶酮酸（5.0mg/支）和1支吖啶黄素（3.0mg/支）

  2. 在无菌条件下分装试管，每支试管10ml。

  3. 制备质控菌液。

  4. 目标菌的接种。

  接种10CFU~100CFU的单核细胞增生李斯特氏菌，接种体积不超过1mL，同时接种两个平行管，混匀。将相同体积的目标菌菌悬液(与试管接种同一稀释 度) 倾注平板(或适宜稀释度0.1mL涂布平板) ，接种两个平板，作接种量计数用 。30℃需氧培养24h。

  5. 非目标菌的接种

  接种1000CFU~5000 CFU的大肠埃希氏菌、粪肠球菌 ，接种体积不超过1mL，同时接种两个平行管，混匀。同时将1mL菌悬液(比试管接种小10倍~100倍稀释度)倾注平板(或适宜 稀释度0.1mL 涂布平板)，接种两个平板，作接种量计数用，30℃需氧培养24h。

  6.培养液的接种

  培养结束后，吸取10μL单核细胞增生李斯特氏菌培养液涂布至PALCAM琼脂，每管一个平板，置于36℃需氧培养48h。

  吸取10μL大肠埃希氏菌/粪肠球菌培养液分别涂布于TSA平板，每管一个平板，置于36℃需氧培养24h。

四、结果观察与解释

  接种以下质控菌株，30℃需氧培养24小时：

质控菌株	菌株编号	接种量(CFU)	测试结果	质控评价标准
单核细胞增生李斯特氏菌	ATCC 19115	10-100	在PALCAM平板上菌落数多不可计；菌落呈灰绿色，中心凹陷黑色，周围有黑色	在PALCAM上>10CFU 灰色至黑色菌落，带有黑色晕环
大肠埃希氏菌	ATCC 25922	1000-5000	在TSA平板上菌落数为0/0	在TSA上<100CFU
粪肠球菌	ATCC 29212	1000-5000	在TSA平板上菌落数为0/0	在TSA上<100CFU

图1-1 李氏增菌肉汤LB1培养基微生物质控结果

备注：a:单核细胞增生李斯特氏菌，b:大肠埃希氏菌，c:粪肠球菌

图1-2  10μL单核细胞增生李斯特氏菌培养液涂布至PALCAM琼脂

五、注意事项

  本培养基仅为细菌鉴定的一部分，需做其他补充试验。

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