一、简介与问题
亚硫酸盐琼脂培养基主要用于厌氧亚硫酸盐还原杆菌的试管计数。使用该培养基时,需要加入铁粉,培养时目标菌产生的H2S与之反应,形成黑色的区域。由于铁粉需要使用人员单独加入,有客户反馈加入铁粉灭菌后,很多铁粉沾在试管壁上,即使用力摇晃也不能完全脱落。本文就此以对比试验的方式进行说明展示。
二、试验设置
共设三组试验,第一组为试管中先加入培养基,再加铁粉;第二组为试管中先加入培养基,上面覆盖一层液体石蜡,再加铁粉(设置该组试验,是为了验证本公司另一个需要加入铁粉的产品-疱肉培养基即用型管的情况);第三组为试管中先加入铁粉,使铁粉尽量不要粘附在试管壁上,然后再加入培养基。上述操作全部完成后,进行高压灭菌。
三、试验结果
(1)灭菌前,第一组的铁粉全部在培养基上面;第二组部分铁粉沉到试管底部,部分铁粉透过液体石蜡留在培养基上面,液体石蜡表面也粘附一些铁粉;第三组铁粉全部在试管底部(如图1)。
图1 灭菌前三组试管中铁粉的状态
(从左到右依次为第一组、第二组、第三组)
(2)灭菌后,不摇晃,第一组和第二组试管壁上粘附了很多铁粉,第三组试管壁上基本没有(如图2)。
图2 灭菌后三组试管中铁粉的状态
(从左到右依次为第一组、第二组、第三组)
(3)灭菌后的试管进行摇晃,前两组试验试管上面浮着的铁粉会分散到培养基中,但是试管壁上粘附的铁粉很难脱落(如图3)。
图3 摇晃后三组试管中铁粉的状态
(从左到右依次为第一组、第二组、第三组)
通过上面的试验,可以看出,在制备这款培养基试管时,建议先加入铁粉,且使铁粉全部落在试管底部,尽量不要粘在试管壁上,然后再加入培养基,进行灭菌操作。
四、怎样使铁粉分散
试管中先加入铁粉,再加培养基,然后高压灭菌,灭菌完毕,铁粉依然沉积在试管底部,只要趁热充分振荡试管,即可分散到整个试管中(如图4)。
图4 沉积的铁粉混匀前后的状态
五、建议方法与要领
如果配制的试管比较多,逐个试管加入铁粉会显得稍微繁琐,也可以采用下面几种办法,达到上面所说的效果。
(1)将铁粉直接加入待煮培养基中,搅拌均匀,进行煮沸溶解,趁热分装,分装时要不停搅拌。这种情况下,不管凉水中先放入铁粉,还是热水中加入铁粉,灭菌后铁粉会分布在培养基所占体积的试管壁上,底部相对多一些(如图5)。
图5 铁粉与培养基一起搅拌溶解、灭后的状态
(2)如果配制前忘记加铁粉,待培养基煮好后,也可以加入铁粉充分搅拌后,分装、灭菌,这样灭菌后,铁粉也会集中在试管底部,趁热摇匀,铁粉也能分散到整个试管中(如图6)。
图6 铁粉直接加入煮后的培养基中及灭菌后的状态
综上,不管用哪种方式,只要保证灭菌前,铁粉不是漂浮在试管中的培养基上表面,且灭菌完毕后,及时趁热混匀,铁粉就能分散到试管中的培养基中,不会沾到试管上部的壁上,保证使用效果。
六、使用注意事项
在加样时,需要趁热将样品加入试管中,颠倒数次,在沸水或蒸汽柜中放置15min(加热过程中也需颠倒试管数次),加热后迅速用水冷却试管,待试管内培养基完全凝固后,将试管预热至50℃-55℃厌氧培养48 h。有关结果判断,参考亚硫酸盐琼脂-点击查看。
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