本文挑选了部分客户咨询较多、反馈较多的问题以问答的形式进行答疑。
常见问题1
Q:我们配制培养基为什么会出现大量沉淀?
A:部分培养基含有较为丰富的无机盐成分,在加热和灭菌的过程中很容易发生反应形成沉淀。建议配制培养基时使用去离子水、蒸馏水、纯化水,切勿使用普通自来水。但由于各单位使用的去离子水、蒸馏水、纯化水实际含有离子程度并不相同(尤其是制水机自制水)在发生此种情况时,可以尝试使用市面上的高纯度水(如屈臣氏、娃哈哈等品牌水)进行溶解。
我们也发现部分客户会自行调节pH或者添加额外的营养成分,这些都可能导致培养基突然出现大量沉淀,往往是离子之间发生了复杂的化学反应。
另有部分培养基本身含有不溶于水的物质,如TTB含有大量碳酸钙,其本身就不能够完全溶解,此种情况为正常现象,将沉淀摇匀后分装使用即可。
常见问题2
Q:我们购买的液体培养基,自己加了琼脂之后灭菌完毕非常浑浊(生长不佳),这是怎么回事?
A:虽然一般认为琼脂不提供营养成分,仅作为凝固剂帮助培养基成型。但在实际的生产过程中,由于工艺和来源等原因,琼脂还是会含有部分糖或其他杂质,这些杂质会一定程度上影响微生物的生长,影响实验结果的判断。部分含有杂质较多的琼脂,灭菌完毕后会与培养基中的离子反应,使得培养基浑浊,只要不是出现大量沉淀,一般不影响使用。部分客户自购的琼脂实际上凝胶强度较高,按照标准添加量,会使得凝固后的平皿凝胶强度过大,影响菌落的生长,这时候会造成菌落生长较小,生长较慢,回收率下降等负面影响,此时可略微降低琼脂的添加量。
尤其部分植物组织培养的液体培养基,其含有极为丰富的无机盐成分,添加琼脂或其他营养成分时,应慎重考虑,最好先少量实验,测试生长效果。
常见问题3
Q:为什么我们购买了你们的干粉培养基,灭菌完毕以后颜色偏深?
A:大多数培养基都含有丰富的营养成分,如酵母浸粉,葡萄糖,乳糖等,这些糖类、浸粉类成分容易受热焦化、酸化,绝大多数出现灭菌后颜色过深的情况都是因为灭菌时间过久、温度过高,灭菌前没有充分溶解导致的。建议客户充分加热溶解培养基后进行分装,灭菌前确保溶解后的产品没有明显的成团或成块的粉末。其次应严格按照瓶身标签的灭菌温度和时间进行灭菌,若更改灭菌时间和温度,客户应进行工艺验证。同时应注意灭菌完毕后及时将培养基从灭菌锅内取出,请勿将培养基长时间闷在灭菌锅内。
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