一、产品用途及原理:
用于细菌的复合生化试验(动力靛基质尿素酶试验)。
培养基为含尿素、蛋白胨的半固体培养基,指示剂为酚红。具有色氨酸酶的细菌能分解色氨酸产生吲哚,加入吲哚试剂后,培养基上层的吲哚会变红;有动力的细菌沿穿刺线扩散生长;有些细菌能产生尿素酶,将尿素分解、产生2个分子的氨,使培养基变为碱性,酚红呈粉红色。尿素酶不是诱导酶,因为不论底物尿素是否存在,细菌均能合成此酶,其活性最适pH为7.0。
二、培养基配方(g/L):
胰蛋白胨 |
10.0 |
磷酸氢二钾 |
2.0 |
氯化钠 |
5.0 |
酚红 |
0.012 |
葡萄糖 |
1.0 |
琼脂 |
4.0 |
pH 7.0±0.1 25℃ |
三、试验方法:
1. 称取本品22g,加热溶解于950ml蒸馏水中,121℃高压灭菌15分钟,冷却至45-50℃左右时,无菌加入40%的尿素溶液50mL,混匀,分装试管备用。
2. 制备质控菌株。
3. 用接种针挑取新鲜菌苔穿刺接种于试管中。
4. 36±1℃培养18-24小时,扩散生长为动力阳性;滴加吲哚试剂后呈玫瑰红色为阳性;培养基变红尿素阳性,记录实验结果。
四、结果观察与解释
接种以下质控菌株,36±1℃培养18-24小时:
质控菌株 |
菌株编号 |
接种量(CFU) |
生长情况 |
其他特征 |
鼠伤寒沙门氏菌 |
ATCC14028 |
/ |
+++ |
动力+、吲哚-、尿素- |
普通变形杆菌 |
ATCC19114 |
/ |
+++ |
动力+、吲哚+、尿素+ |
大肠埃希氏菌 |
ATCC25922 |
/ |
+++ |
动力+、吲哚+、尿素- |
福氏志贺氏菌 |
ATCC12022 |
/ |
+++ |
动力-、吲哚-、尿素- |
图1 动力-吲哚-尿素培养基(MIU)微生物质控结果
备注:a:鼠伤寒沙门氏菌,b:普通变形杆菌,c:大肠埃希氏菌,d:福氏志贺氏菌,e:空白
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