一、试验原理：
克罗诺显色培养基是青岛银河澳门官网入口公司根据GB4789.40-2024生产的培养基，用于婴幼儿配方食品、婴幼儿辅助食品、乳及乳制品及其原料中克罗诺杆菌的检验。克罗诺杆菌显蓝—绿色菌落，其它菌显无色或黄色。
胰蛋白胨和酵母浸粉提供氮源、维生素、生长因子；氯化钠维持渗透压；琼脂为凝固剂；脱氧胆酸钠主要抑制革兰氏阳性菌的生长，柠檬酸铁铵和硫代硫酸钠可使产硫化氢的非目标菌呈现黑色，阪崎克罗诺杆菌可特异性分解底物5-溴-4-氯-3-吲哚-α-D-吡喃葡糖甙使菌落显蓝-绿色，其他不产硫化氢、不分解底物的菌一般显无色或黄色。
二、培养基配方（g/L）：
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胰蛋白胨 |
7.0 |
|
酵母浸粉 |
3.0 |
|
氯化钠 |
5.0 |
|
柠檬酸铁铵 |
1.0 |
|
硫代硫酸钠 |
1.0 |
|
脱氧胆酸钠 |
0.25 |
|
5-溴-4-氯-3-吲哚-α-D-吡喃葡糖甙 |
0.15 |
|
琼脂 |
15.0 |
|
pH 7.3±0.2 25℃ |
|
三、试验方法：
粉体装培养基的使用：
1. 称取本品6.48g加入200ml蒸馏水，加热煮沸完全溶解，121℃高压灭菌15分钟，冷却至50℃左右时，倾入无菌平皿。
2. 轻轻混匀mLST-Vm肉汤培养物，用10ul接种环挑取1环增菌液划线接种于克罗诺杆菌显色培养基平板，接种2个平板。
3. 倒置放入培养箱36℃±1℃培养24h±2h，典型的克罗诺杆菌为蓝 - 绿色菌落。
4. 挑取可疑菌落划线接种于TSA平板36℃±1℃培养24h±2h，做PCR鉴定或生化鉴定。
四、结果观察与解释
接种以下质控菌株，36℃±1℃培养24h±2h：
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质控菌株 |
菌株编号 |
接种量(CFU) |
质控评定标准 |
其他特征 |
|
阪崎克罗诺杆菌 |
ATCC 29544 |
50-250 |
PR≥0.5 |
蓝绿色菌落 |
|
鼠伤寒沙门氏菌 |
ATCC 14028 |
/ |
/ |
无色，有黑色中心 |
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普通变形杆菌 |
CMCC(B) 49027 |
/ |
/ |
灰色至黑色菌落 |
|
金黄色葡萄球菌 |
ATCC 6538 |
/ |
G≤1 |
/ |
|
粪肠球菌 |
ATCC 29212 |
/ |
G≤1 |
/ |
图1-2 克罗诺显色培养基微生物质控结果
备注：a：阪崎克罗诺杆菌 b:鼠伤寒沙门氏菌 c：普通变形杆菌d：金黄色葡萄球菌e：粪肠球菌
五、注意事项
本培养基仅为细菌鉴定的一部分，需做其他补充试验。
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