一、试验原理
溶血性链球菌（Streptococcus hemolyticus）在自然界中分布较广，是一种常见的病原微生物，呈球形或椭圆形，该菌不形成芽孢，无鞭毛，易被普通的碱性染料着色，革兰氏阳性菌，需氧或兼性厌氧菌，营养要求较高。链球菌根据其对红细胞的溶解作用程度不一，又可分为α（甲）、β（乙）、γ（丙）三型。其中β-溶血性链球菌，具有完全溶血作用，其在血平板上生长产生的溶血素可在菌落周围形成一个2 mm-4 mm、界限分明、完全透明的无色溶血环。α-溶血性链球菌，具有不完全溶血作用，其菌落周围出现1 mm-2 mm的草绿色溶血环。γ-溶血性链球菌不产生溶血素，无溶血环。
溶血性链球菌广泛存在于水、空气、尘埃、粪便及健康人和动物的口腔、鼻腔、咽喉中，可通过直接接触、空气飞沫传播或通过皮肤、粘膜伤口感染，被污染的食品如奶、肉、蛋及其制品也会对人类进行感染。溶血性链球菌通常通过以下途径污染食品：①食品加工人员及其他直接接触人员有化脓性炎症时手口鼻接触或空气飞沫污染；②食品原材料带菌，如畜禽局部化脓；③熟制品因包装不善而使食品受到污染。被污染的食品会使人类通过直接接触或皮肤、黏膜伤口等多种方式感染，危害极大，其中β溶血性链球菌危害最大，故常用草酸钾兔血浆检验该菌。
用途：用于β型溶血性链球菌的链激酶试验（GB 4789.11-2014 β型溶血性链球菌检验）。
原理：β型溶血性链球菌群能产生链激酶，该酶能使血液中的纤维蛋白酶原变成纤维蛋白酶，而后溶解纤维蛋白，使血凝块溶解，为阳性反应。
二、主要组成成分
冻干兔血浆、草酸钾
三、试验方法
1、按箭头方向掀开并撕下铝箔盖，每支西林瓶中加入1 mL灭菌生理盐水轻微摇晃至完全溶解，然后吸取全部草酸钾兔血浆转移至灭菌的空试管中。
2、加入经36℃±1℃培养18h-24h的可疑菌的TSB培养液0.5mL及0.25%氯化钙溶液0.25mL，振荡摇匀。
3、置于36℃±1℃水浴中10min，血浆混合物自行凝固（凝固程度至试管倒置，内容物不流动）。
4、放置36℃±1℃恒温培养箱中继续培养24h，观察凝固的血浆是否能够重新溶解液化，凝固的血浆重新完全溶解为阳性，不溶解为阴性，β型溶血性链球菌为阳性。
四、质控结果
接种以下质控菌株，放置36℃±1℃恒温培养箱中，需氧培养24h。结果如图1所示。
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质控菌株 |
菌株编号 |
方法 |
质控结果 |
|
溶血性链球菌 |
CMCC(B) 32210 |
定性 |
阳性（液化） |
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大肠埃希氏菌 |
ATCC 25922 |
定性 |
阴性（不液化） |
|
金黄色葡萄球菌 |
ATCC 25923 |
定性 |
阴性（不液化） |
图1 冻干草酸钾兔血浆的微生物质控结果
五、注意事项
1、冻干草酸钾兔血浆在使用前需观察是否变质，变质常表现为有凝块，加入生理盐水后不能呈完全溶解状态，该状态草酸钾兔血浆不能使用，会影响后续结果判断。
2、加入可疑菌培养物和氯化钙后应水浴至血浆凝固才能继续培养，若不能凝固则不能进行后续试验判断。
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