一、培养基用途:
用于艰难梭菌的选择性分离培养。
二、培养基成分及使用方法:
1.培养基成分
成分 |
含量(g/L) |
胰蛋白胨 |
10.0 |
牛肉浸粉 |
10.0 |
酵母粉 |
3.0 |
葡萄糖 |
1.0 |
可溶性淀粉 |
1.0 |
氯化钠 |
5.0 |
碳酸氢钠 |
0.4 |
L-半胱氨酸盐酸盐 |
0.5 |
丙酮酸钠 |
1.0 |
L-精氨酸 |
1.0 |
焦磷酸盐 |
0.25 |
果糖 |
6.0 |
琥珀酸 |
0.5 |
氯化血红素 |
0.01 |
中性红 |
0.03 |
琼脂 |
13.2 |
pH 7.2±0.2 25℃ |
2.使用方法
称取本品 53.20g,加热溶解于1000ml蒸馏水中,分装三角瓶,每瓶200mL。121℃高压灭菌15min,冷却至45-50℃时,每200mL培养基加入50%卵黄乳液10mL、无菌环丝氨酸0.1g和无菌头孢西丁3.2mg。混匀,倾入无菌平皿,备用。
三、 原理:
蛋白胨、牛肉浸粉、酵母粉、葡萄糖可溶性淀粉、L-半胱氨酸盐酸盐、L-精氨酸、焦磷酸盐、氯化血红素、琥珀酸、丙酮酸钠提供碳源、氮源、维生素和生长因子;果糖为可发酵糖类;氯化钠维持均衡的渗透压;中性红是酸碱指示剂,酸性条件变黄;琼脂是培养基凝固剂;环丝氨酸和头孢西丁可抑制杂菌和其他梭菌;50%卵黄乳液可检验是否产脂酶,艰难梭菌不产生脂酶故无沉淀环。
四、实验结果:
1.按使用方法制备培养基,接种以下质控菌株,放置35℃厌氧培养48小时。
质控菌株 |
菌株编号 |
接种量(CFU) |
生长情况 |
其他特征 |
艰难梭菌 |
ATCC43593 |
/ |
生长良好 |
黄色菌落,无沉淀环 |
产气荚膜梭菌 |
ATCC13124 |
/ |
抑制 |
/ |
2.艰难梭菌在培养基上的生长情况如下图所示:
图1-1 CCFA琼脂培养基微生物质控结果
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