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精氨酸支原体肉汤培养基的原理和使用方法

刘浩然
录入时间:2024-3-27 10:37:15 来源:青岛银河澳门官网入口

一、产品用途及原理

  用于药品和生物制品中支原体检测。

  猪胃消化粉、牛肉浸粉、酵母浸粉提供氮源、维生素、氨基酸和生长因子,氯化钠可维持均衡的渗透压,葡萄糖是可发酵的糖,L-精氨酸是可水解的氨基酸,酚红为指示剂。


二、培养基配方(g/L)

猪胃消化粉

10.0

牛肉浸粉

5.0

酵母浸粉

5.0

氯化钠

2.5

葡萄糖

1.0

L-精氨酸

2.0

酚红

0.02

pH值7.1-0.2(25℃)


三、口腔支原体检查依据

  口腔支原体检查法在2020年版《中华人民共和国药典》中体现,要求使用精氨酸支原体肉汤培养基培养检测口腔支原体。具体操作要求为:将口腔支原体稀释至10-3-10-5,接种在精氨酸支原体肉汤培养基中,每个稀释度接种3支试管,置于36℃培养7-14天,观察培养基变色结果。口腔支原体可以利用培养基中的精氨酸,使培养基pH值升高,遇指示剂酚红使培养基变红。


四、试验方法

  1、称取本品25.52g,加热溶解于800mL蒸馏水中,121℃高压灭菌15分钟,冷至室温,无菌操作加入灭活小牛血清或马血清200mL和青霉素80万单位,混匀,分装无菌试管,备用。

  2、制备质控菌株,接种至培养基中,做10倍系列稀释,稀释至10-9,并做空白对照。

  3、放置于36℃±1℃恒温培养箱中,微需氧培养7-14天。


五、质控结果

接种以下质控菌株,放置于36℃±1℃恒温培养箱中,微需氧培养7-14天。口腔支原体培养至7天的灵敏度为7,如图1所示。

质控菌株

菌株编号

接种量(CFU)

生长情况

其它特征

口腔支原体

ATCC 23714

/

+++

10-1-10-4稀释度变粉色


图1 精氨酸支原体肉汤培养基培养口腔支原体7天的灵敏度


六、试验注意事项

  1、若使用非一次性试管等容器进行试验,容器使用前应使用蒸馏水冲洗干净,确保无洗涤液等残留物,以免增加试验的不确定性或污染。

  2、灭菌结束后,试管口会有水珠,在进行梯度稀释时,水珠很容易与空气中的细菌接触以致污染,因此,试管口应灼烧至干燥,胶塞也需过火,振荡操作后,若培养基接触到胶塞,还需再次进行灼烧操作。

  3、调节pH时,使用的酸碱试剂均应是灭菌后的。

  4、支原体培养前应使用封口膜封口,可提供微需氧环境以及降低污染的风险。


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注:本文属银河澳门官网入口原创,未经允许不得转载。

 

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