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噬菌体载体



录入时间:2024-1-16 15:47:21 来源:青岛银河澳门官网入口

质粒载体可以克隆的DNA最大片段一般在10kb左右,但在构建一个基因文库时往往需要克隆更大的DNA片段以减少克隆的数量。为此,人们将噬菌体发展成为一种克隆载体。

λ噬菌体属于双链线性DNA分子。野生型λ噬菌体内含有太多的限制性酶切位点,需要经过改造后才能成为可应用的载体。Charon系列λ噬菌体有插入型和替换型两种,带有来自大肠杆菌的β半乳糖苷酶基因lacZ。M13噬菌体是单链环状DNA,改造后的M13mp8,加入了大肠杆菌的lac操纵子,常用于核酸测序。

λ噬菌体是线性双链DNA分子,其长度为48502bp,两端各有由12个碱基组成的5’端凸出的互补黏性末端,当λDNA进入宿主细胞后,互补黏性末端连接成为环状DNA分子,这种由黏性末端结合形成的序列,称为cos位点;λ噬菌体为温和噬菌体,可以整合到宿主细胞染色体DNA上,以溶原状态存在,随染色体的复制而复制;λ噬菌体能包装本身长度的 75%~105%,约38~54kb的DNA片段。

构建λ噬菌体载体时,需要抹去某种限制性内切酶在入DNA分子上的一些识别序列,只在非必需区保留1~2个识别序列。若只保留1个识别序列,则可供外源DNA插入;若保留2个识别序列,则2个识别序列之间的区域可被外源DNA片段置换也可以用合适的限制性内切酶切去部分非必需区,但是所构建的入DNA载体应不小于38kb;同时在λ噬菌体分子合适区域应插入可供筛选的标记基因。

 

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