一、简介

  KCN试验是肠杆菌科各属间的重要鉴别试验方法之一，可将沙门氏菌属和志贺氏菌属与其他肠道菌属相区别。

  其原理是KCN可以抑制某些细菌的呼吸酶系统，细胞色素氧化酶、过氧化氢酶和过氧化物酶均以铁卟啉作为辅基，KCN能和铁卟淋结合，使这些酶失去活性，使细菌生长受到抑制。

二、试验说明

  在做KCN试验时，需要同时接种KCN反应管和KCN对照管，按照一定条件培养足够时间后，KCN反应管中无菌生长（澄清），对照管中有菌生长（浑浊），或者反应管不如对照管浑浊，则判定为KCN试验阴性。

三、操作要点

  做微生物的生化鉴定时，为了达到较好的试验效果，通常会使接种的菌液尽量浓，对于一些通过颜色变化判断结果的生化试验，这是非常有效的方法（见“生化鉴定条使用注意事项及讨论”），但因为KCN试验是通过澄清度来判断结果，如果一开始加入的菌量很多，就可能会使反应管尚未培养即有肉眼可见的浑浊，这样就不好判断究竟是阳性还是阴性。特别是使用生化鉴定条类产品时，产品说明书建议每孔加入100μL菌悬液（菌悬液制备：取一内盛2mL无菌水或无菌生理盐水试管，用接种针从营养琼脂平板上挑取单个菌落至无菌生理盐水中仔细研磨制成均一细菌悬液，每孔加入100μL菌悬液。参考HBI沙门氏菌生化鉴定条(GB)）。这样一来，如果菌悬液浓度过高，更容易出现假阳性现象（如图1）。

图1  菌悬液过浓产生的假阳性结果（左：对照管   右：反应管）

  为了避免这种情况的发生，在做KCN试验时，可采用如下几种方法接种（结果对比如图2）：

（1）用接种环蘸取一环稀释菌液，接种至生化管；

（2）用接种针直接沾取少量菌苔接种至生化管；

（3）如若统一使用每孔加入100μL的形式进行接种，则应使用稀菌液，菌液的加入不会造成生化管肉眼可见的浑浊。

图2  不同接种方式培养后的试验结果

  GB4789.4-2016中，即采用的是第2种方法（截图如下）。

  标准中同时还特别指出，“试验失败的主要原因是封口不严，KCN逐渐分解，产生氢氰酸气体逸出，以致药物浓度降低，细菌生长，因而造成假阳性反应。试验时对每一环节都要特别注意。”

  在使用我公司成品生化管做沙门氏菌时，不管封口还是开口培养，显示的结果均是一致的（如图3），但是为了试验的严谨性，我们还是建议将KCN生化管进行封口培养。

图3  封口培养和开口培养的试验结果

四、注意事项

  另外，还需要提醒一下，KCN是剧毒药，使用时应小心，切勿沾染，以免中毒。夏天分装培养基应在低温环境中进行。即使使用成品生化管，也应尽量在通风环境中操作。

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