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菌种保藏的原理和方法



录入时间:2023-12-12 15:54:55 来源:青岛银河澳门官网入口

1、菌种保藏原理

选用优良的纯种,最好是休眠体(分生孢子、芽孢等),创造一个是微生物代谢不活泼,生长繁殖受抑制,难以突变的环境条件。其环境要素是干燥、低温、缺氧、缺营养以及添加保护剂等。


2、菌种保藏常用方法

1)定期移植保藏法

将菌种接种于适宜的斜面或液体培养基,也可进行穿刺培养,待生长成健壮的菌体(对数期细胞、有性孢子或无性孢子)后,将菌种放置4℃冰箱保藏,每间隔一定时间需重新移植培养一次。芽孢杆菌每 3~6个月移种一次,其他细菌每月移种一次。此方法最早使用且至今仍普遍使用。

2)液体石蜡保藏法

在生长良好的斜面表面覆盖一层无菌的液体石蜡,液面高出培养基1cm,将其置试管架上以直立状态低温保藏。此方法是定期保藏法的补充。

3)沙管保藏法、土壤保藏法

取河沙过24目筛。用10%-20%的盐酸没泡除去有机质,洗涤,烘干,分装入安瓿管,加塞灭菌。需要保藏的菌株先用斜面培养基培养,再用无菌水制成细胞或孢子悬液,将10滴悬液注入装有洗净、灭菌河沙的沙管内,使细胞或孢子吸附在沙上,放到干燥器中吸干沙中的水分,将干燥后的沙管用火焰熔封管口。可以室温或低温保藏。土壤法以土壤代替河沙,不需酸洗,经风干、粉碎、过24目筛,分装灭菌后,同上制备。此法适用于芽孢杆菌,梭状芽孢杆菌、放线菌和一些丝真菌的保藏。

4)麸皮保藏法

或称曲法保藏,将麸皮(也可用各种谷物代替)水或其他培养基成分以一定的比例拌匀,加水或培养液与麸皮的比例为1:0.81:11:1.5,原则是按照不同菌种对水分要求不同而定。将拌匀的麸皮分装在试管或安瓿管等容器中,装入的麸皮应保特疏松,不要紧压。高温灭菌后,将随种的孢子液接入。适宜温度下培养,直至长出菌丝。再放在干燥器中干燥后,20℃以下温度保藏。也可将小管用火焰熔封。常用于放线菌和霉菌的保藏。

5)蒸馏水保藏法

每个试管中装5ml灭菌的无菌水,用接种针从斜面或平板上挑取一环菌种细胞,接入蒸馏水中并使之悬浮,试管用无菌的橡皮塞塞紧,放置10℃低温保藏。需用时,可从管内移出一环接到培养基上,而原来的管加塞后仍可继续保藏。此法是最简单的保藏方法。

6)冷冻干燥保藏法

将菌液在冻结状态下升华其中水分,最后获得干燥的菌种样品。此方法是目前被广泛推崇的方法。

7)液态超低温保藏法

将菌种悬浮封存于圆底安瓿管或塑料的液氮保存管(材料应耐受较大温差骤然变化)内,放到-196~-150℃的液氮罐或液氮水箱内保藏。此方法已被公认为当前最有效的菌种长期保存技术之一,适用范围最广的微生物保藏法。

8)甘油保藏法

菌种悬浮在10%(体积分数)甘油蒸馏水,置低温(-80~70℃)保藏。实际中,常将待保藏菌培养至对数期的培养液直接加到已灭过菌的甘油中,并使甘油的终浓度在10%~30%左右,再分装于小离心管中,置低温保藏。基因工程常用此法保藏。

 

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