一、用途及试验原理
用途：用于猪肺炎支原体的培养。
原理：蛋白胨，牛心浸粉，酵母浸粉提供氮源，维生素，氨基酸和生长因子。
二、培养基配方（g/L）
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蛋白胨 |
10.0 |
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牛心浸粉 |
1.6 |
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酵母浸粉 |
6.0 |
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pH值7.6±0.1（25℃） |
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三、试验方法
1、称取本品17.6g，加热溶解于800mL纯化水中，121℃高压灭菌15分钟，冷却至室温，无菌操作加入200 mL猪血清，混匀，分装，备用。
2、制备质控菌株，接种至培养基中，做10倍系列稀释，稀释至10-9，并做空白对照。
3、放置于36℃±1℃恒温培养箱中，微需氧培养7-14天。
四、试验注意事项
1、若使用非一次性试管等容器进行试验，容器使用前应使用蒸馏水冲洗干净，确保无洗涤液等残留物，以免增加试验的不确定性或污染。
2、灭菌结束后，试管口会有水珠，在进行梯度稀释时，水珠很容易与空气中的细菌接触以致污染，因此，试管口应灼烧至干燥，胶塞也需过火，振荡操作后，若培养基接触到胶塞，还需再次进行灼烧操作。
3、调节pH时，使用的酸碱试剂需是无菌的。
4、支原体培养前应使用封口膜封口，可提供微需氧环境以及降低污染的风险。
五、质控结果
接种以下质控菌株，放置于36℃±1℃恒温培养箱中，需氧培养7-14天。猪肺炎支原体培养至11天的试验结果如图1所示。
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质控菌株 |
菌株编号 |
接种量（CFU） |
方法 |
质控结果 |
其它特征 |
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猪肺炎支原体 |
/ |
10-100 |
定量 |
生长良好 |
10-9稀释度管变黄 |
图1 猪肺炎支原体疫苗培养基培养猪肺炎支原体11天时的试验结果
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