1．分析目标化合物
甲硫威、甲硫威亚砜、甲硫威砜
2、仪器设备
带柱后衍生荧光检测器的高效液相色谱仪。
3、试剂
除下列试剂外，使用附录2所列试剂。
发荧光液：将4.0g氢氧化钠，300mg邻苯二甲醛溶解在20Ml乙醇中；将18.5g硼酸和100μL 3-巯基丙酸溶于水中至1,000mL。
4．标准品
甲硫威：含甲硫威99.5％以上，熔点为121.5℃
甲硫威亚砜：含甲硫威亚砜96.5％以上，熔点为133℃～134℃。
甲硫威砜：含甲硫威砜97.5％以上，熔点为160℃～163℃。
5．试验溶液的制备
a 提取方法
① 谷类、豆类和种子类
将样品粉碎，过420μm的标准网筛后，称取其10.0g，加入10mL水，放置2小时。
加入20mL丙酮，搅拌2分钟后，加入1g 氯化钠、30mL二氯甲烷（特级）：正已烷（1：1）混合溶液。搅拌2分钟后，以每分钟3000转离心分离3分钟，上清液移入200mL三角瓶中。沉淀中加入40 mL二氯甲烷（特级）：正已烷（1：1）混合溶液，搅拌2分钟后，按上述同样条件离心，合并上清液于上述三角瓶中。加入适量无水硫酸钠，不时振摇、混合，放置15分钟后，滤入磨口减压浓缩器中。再用20mL二氯甲烷（特级）洗涤三角瓶，以此洗液洗涤滤纸上的残留物，重复操作两次，合并两洗液于减压浓缩器中，40℃以下浓缩至约1mL。在室温下用氮气吹干。
残留物中加入20mL乙腈饱和正已烷和20mL乙腈溶解，移入100mL分液漏斗中。用振荡器激烈振荡5分钟后，静置，乙腈层移入磨口减压浓缩器中，40℃以下浓缩至约1mL。在室温下用氮气流进一步吹干。残留物中加入1mL二氯甲烷（特级）溶解。
② 水果和蔬菜
准确称取约1kg样品，必要时定量加入适量水，搅碎混合均匀后，称取相当于20.0g样品的量。
加入20mL丙酮，搅拌2分钟后，加入30mL二氯甲烷（特级）：正已烷（1：1）混合溶液、1g 氯化钠。搅拌2分钟后，以每分钟3000转离心3分离分钟，上清液移入200mL三角瓶中。沉淀中加入40 mL二氯甲烷（特级）：正已烷（1：1）混合溶液，搅匀2分钟后，按上述同样条件进行离心，合并上清液于上述三角瓶中。加入适量无水硫酸钠，不时振摇、混合，放置15分钟后，滤入磨口减压浓缩器中。再用20mL二氯甲烷（特级）洗涤三角瓶，以此洗液洗涤滤纸上的残留物，重复操作两次，合并两洗液于减压浓缩器中，40℃以下浓缩至约1mL。在室温下用氮气流进一步吹干。残留物中加入1mL二氯甲烷（特级）溶解。
b、净化方法
在酰胺丙基甲硅烷化硅胶小柱（360mg）中注入10mL二氯甲烷（特级），弃去流出液。柱中加入a 提取方法所得的溶液后，注入10mL二氯甲烷（特级）：甲醇（99：1）混合溶液。收集流出液于磨口减压浓缩器中，在40℃以下除去大部分二氯甲烷和甲醇，在室温下用氮气流进一步吹干。残留物中加入0.5mL甲醇溶解，加入1.5mL稀盐酸，充分振摇混合，用孔径0.45μm滤膜器过滤，此为试验溶液。
6、操作方法。
a 定性试验
按下列操作条件进行试验，试验结果应与标准品的一致。
操作条件
柱填充剂：十八烷基甲硅烷基化硅胶（粒径5μm）。
柱：内径4.6mm、长250mm不锈钢管。
柱温：50℃
检测器：激发波长340nm，荧光波长455nm。
流动相：A 5%甲醇溶液，B 80%甲醇溶液，调整流速使甲硫威约35分钟流出。
浓度梯度：用5%甲醇溶液：80%甲醇溶液（17：3）的混合溶液送液3分钟后，由A：B（17：3）到（0：1）运行32分钟。再输送80%甲醇溶液10分钟后，输送5%甲醇溶液：80%甲醇溶液（17：3）的混合溶液15分钟。
水解反应槽：移动相中注入0.05mol／L氢氧化钠溶液。保持一定的注入量。
水解反应槽温度：90℃
荧光反应槽：移动相中注入荧光发生液。保持一定的注入量。
荧光反应槽温度：50℃
b 定量试验
根据与a定性试验相同试验条件所得的试验结果，用峰高法或峰面积法分别对甲硫威、甲硫威亚砜和甲硫威砜进行定量，求得甲硫威、甲硫威亚砜和甲硫威砜的含量，按下式求出包括甲硫威亚砜和甲硫威砜的甲硫威含量。
甲硫威（包括甲硫威亚砜和甲硫威砜）的含量（mg/kg）=A+B×0.93+C×0.88
A：甲硫威的含量（mg/kg）
B：甲硫威亚砜的含量（mg/kg）
C：甲硫威砜的含量（mg/kg）
7．定量限
   
   

 

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