对于原核细胞,常采用转化将目的基因导入受体细胞。原核细胞的转化过程就是一个携带基因的外源DNA分子通过与膜结合进入受体细胞、并在胞内复制和表达的过程。转化过程包括制备感受态细胞和转化处理。
感受态细胞(competentcells)是指处于能摄取外界DNA分子的生理状态的细胞。在制备感受态细胞时,应注意:
① 在最适培养条件下培养受体细胞至对数生长期,培养时一般控制受体细胞密度OD600在0.4左右;
② 制备的整个过程控制在0~4℃;
③ 为提高转化率,常选用CaCl2溶液。
CaCl2促进转化的机制尚不清楚,可能是CaCl2在细胞壁上打了一些孔,DNA分子就能够从这些孔中进人细胞,这些孔随后又被宿主细胞修复。
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