一、培养基用途:
用于副溶血性弧菌生化鉴定。
二、原理:
某些细菌可产生精氨酸脱羧酶,使精氨酸脱去羧基,生成精胺,从而使培养基变碱性并通过指示剂变色来观察。脱羧酶是适应酶或称诱导酶,对底物有特异性,在无相对氨基酸的培养基中不产生此酶,并且需要酸性环境和适宜温度。故在培养基中加入葡萄糖,使细菌发酵葡萄糖产酸,以利于脱羧酶的产生。氨基酸的分解是在厌氧条件下进行,故在培养基表面加液体石蜡。由于细菌发酵葡萄糖产酸,在培养初期培养基和对照培养基呈黄色,继续培养时,若氨基酸经脱羧或水解产生胺类则培养基变碱,呈紫色或紫红色,即为阳性反应;如至培养末期培养基如同对照管一样均呈黄色,则判为阴性反应。
三、培养基成分
成分 |
含量(g/L) |
酵母浸粉 |
3.0 |
L-精氨酸 |
5.0 |
葡萄糖 |
1.0 |
溴甲酚紫 |
0.016 |
氯化钠 |
30.0 |
pH 6.7±0.1 25℃ |
四、操作方法
1、用磨砂轮在安瓿瓶颈部划线一圈,掰开待用;
2、将标准储备菌株接种到非选择性肉汤中或采用其他制备方法,制备成5 McFarland浊度(约109CFU/ml)的菌悬液;
3、吸取0.05ml-0.08ml(约1-2滴)菌悬液至3%NaCl精氨酸双水解酶生化管生化管,36±1℃培养24±2h后,观察试验结果。
五、实验结果
接种以下质控菌株,36±1℃培养24±2h:
质控菌株 |
菌株编号 |
生长情况 |
其他特征 |
副溶血性弧菌 |
ATCC17802 |
+++ |
阴性,黄色 |
普通变形杆菌 |
ATCC13315 |
+++ |
阴性,黄色 |
溶藻弧菌 |
ATCC17749 |
+++ |
阴性,黄色 |
阪崎肠杆菌 |
ATCC29004 |
+++ |
阳性,紫色 |
创伤弧菌 |
ATCC27562 |
+++ |
阴性,黄色 |
图1 3%NaCl精氨酸双水解酶生化管质控结果
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