一、试验原理

  哥伦比亚血琼脂基础（HB0124）营养非常丰富，可用于培养各种营养要求苛刻的细菌。特殊蛋白胨为多种蛋白胨类混合物，提供细菌生长所需的氮源、氨基酸、维生素及生长因子，促进营养要求苛刻的细菌生长；可溶性淀粉提供碳源；氯化钠维持平衡的渗透压；琼脂是凝固剂。

  本培养基使用时需配套添加无菌脱纤维羊血（1001339-1）使用。脱纤维羊血中含有蛋白质和生长促进因子。进一步保障营养要求苛刻的微生物生长，如链球菌等。血液添加入含琼脂培养基中，不仅可促进微生物快速生长繁殖，也可以观察溶血现象，不同的细菌都有其特定的溶血环，可据此对细菌进行一定程度的鉴别。

二、培养基配方（g/L）

三、试验方法

  1、称取本品39.0g，加热溶解于1000mL蒸馏水中，分装，121℃高压灭菌15分钟，冷却至50℃左右时，加入5%-10%无菌脱纤维羊血，混匀备用。

  2、准备质控菌株，接种至哥伦比亚血琼脂上。

  3、放置于36℃±1℃恒温培养箱中，需氧培养18h-24h。

四、质控结果

  接种以下质控菌株，按规定的适宜条件培养后，菌株培养结果见图1。

质控菌株	菌株编号	接种量（CFU）	方法	质控结果
蜡样芽孢杆菌	CMCC(B) 63303	/	定性	菌落周围产生β溶血环
金黄色葡萄球菌	ATCC 6538	/	定性	菌落周围产生β溶血环
乙型溶血性链球菌	CMCC(B) 32210	/	定性	菌落周围产生β溶血环
肺炎链球菌	ATCC 6305	/	定性	菌落周围产生α溶血环

图1 哥伦比亚血琼脂基础培养基的微生物质控结果

五、注意事项

  1、培养基中含少量淀粉，若灭菌前未加热煮沸溶解，灭菌后冷却可能出现少量白色沉淀。

  2、无菌脱纤维羊血需置于2℃-8℃进行保存，在试验过程中，无菌脱纤维羊血要提前拿出使其自然恢复至室温后再使用，以免与琼脂温差过大，导致羊血与液态琼脂混合时琼脂接触到低温羊血瞬间凝固产生琼脂块影响平板制备效果。

  3、培养基在加入无菌脱纤维羊血时，要注意培养基温度，避免过高或过低，以45℃-50℃为宜，可通过恒温水浴锅进行温度控制。同时要控制好锥形瓶摇动混匀的力度，以免产生较多气泡，影响所制平板的外观质量和使用效果。可阅读相关文章：《光洁平整不产气泡的血平板怎么制作》进一步了解学习。

  4、因哥伦比血琼脂营养成分及其丰富，十分利于各种细菌微生物生长，故在制备及使用哥伦比亚血琼脂的过程中请务必注意无菌操作，以免造成杂菌污染，影响试验结果。

  5、无菌脱纤维羊血产品源自羊血液制得，故保质期较短（1个月），建议在选购本产品时充分考虑试验所需用量，避免一次性过多购入导致产品超保质期失效。为保证效果稳定，尽量避免同一瓶无菌脱纤维羊血反复取用（2℃-8℃保存/恢复室温），这可能导致血液成分加速氧化、失活，也会带来更大的杂菌污染风险，无菌脱纤维羊血在出现变色后应避免再次使用。

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