“三区划线法”是实验室最常用的平板划线接种方法,通过在平板上划线,将细菌在琼脂平板表面充分地分散开,使单个细菌能固定在一点上繁殖,形成单个菌落,以达到分离纯化地目的,常常分三个区域进行划线,故称为“三区划线法”。
“三区划线法”的操作:第一区起始位置可反复划线,然后之字形划线,划线区域不超过平板1/3;第二区,平板旋转60度,之字形划线,最初的几条线与第一区的右侧末端交叉且之字划线,之后连续划线不再与一区接触;第三区,平板再旋转60度,进行三区划线,规则与第二区划线相同。各区首尾相接,菌量逐步减少,达到形成单个菌落的目的。
为什么划不出单菌落?常见原因如下:
1.没有充分利于好划线区域;
2.各区域线过于密集,线与线之间重叠;
3.与前一区交叉过多;
4.划线时接种环接触点变动,未始终保持接种环的一点接触琼脂表面;
5.未掌握好划线力度与角度,划破琼脂;
6.待接种的细菌菌量过多时,可在第一区划线完成后进行灼烧,再进行第二、三区的划线。
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