一、选择性液体计数培养基的介绍
在GB4789.28中,列举了三个选择性液体计数培养基:月桂基硫酸盐胰蛋白胨肉汤(LST)、煌绿乳糖胆盐肉汤(BGLB)和EC肉汤,此类培养基主要用于特定菌株的MPN法计数,培养基本身具有一定的选择性,同时目标菌在培养基中可观察到产气反应,以此进行判断所检目标菌是否存在。
二、培养基的出厂检验
待测培养基制备:按照说明书进行配制,分装至试管,每管10mL,并加入小倒管,灭菌冷却后备用。使用前应观察倒管内是否存在气体,若倒管内存在气体,应排气后再使用。
1.目标菌的检验
菌悬液制备:将质控菌株接种至非选择性肉汤或平板中进行活化培养,使用生理盐水或磷酸盐缓冲液进行十倍系列稀释至含菌量为10-100CFU/mL。
接种及培养:吸取1mL制备好的菌悬液加入至待测培养基试管中,接种2支平行,同时使用TSA(或其他适宜培养基)进行倾注,计数接种量,置于标准中规定的条件下进行培养。
结果判定:接种目标菌的试管浊度值应达到2,倒管内应有气体产生,气体充满倒管1/3以上。
2.非目标菌的检验
菌悬液制备:将质控菌株接种至非选择性肉汤或平板中进行活化培养,使用生理盐水或磷酸盐缓冲液进行十倍系列稀释至含菌量为1000-5000CFU/mL。
接种及培养:吸取1mL制备好的菌悬液加入至待测培养基试管中,接种2支平行,同时使用TSA(或其他适宜培养基)进行倾注(比接种梯度小1-2个稀释度),计数接种量,置于标准中规定的条件下进行培养。
结果判定:接种非目标菌的试管浊度值应为0或1,无产气现象。
三、培养基的验收方法
将质控菌株接种至非选择性肉汤培养基中过夜培养,稀释至10-3,也可采用其他方法制备含菌量105-107CFU/mL的菌悬液,使用1μL接种环挑取1环菌液,接种至待测培养基中,置于标准规定的条件进行培养。
结果判定:接种目标菌的试管浊度值应达到2,倒管内气体充满1/3以上;接种非目标菌的试管浊度应为0或1,无产气现象。
相关标准:
GB 4789.28-2013 培养基和试剂的质量要求 -标准下载
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