一、弧菌简介
弧菌(Vibrio)是常存在于河水、湖水、海水等环境中的一类革兰氏阴性弯杆菌,一些水产品中经常会带有致病性的弧菌,如霍乱弧菌、副溶血性弧菌、创伤弧菌等,可通过伤口或食道感染,某些血清型的菌株有强烈的毒性(如O1群霍乱弧菌),感染后造成严重的症状,甚至死亡。不同的弧菌具有不同的嗜盐性,大部分弧菌在含3%左右浓度氯化钠的培养基中生长旺盛,因此常使用2216E培养基或3%氯化钠TSA培养弧菌。
二、活化方法
培养基:弧菌的活化常用2216E液体培养、2216E琼脂或3%氯化钠胰蛋白胨大豆琼脂。也可以使用其他非选择培养基补充氯化钠至3%左右使用,对于淡水类弧菌,也可以使用TSB、BHI等培养基活化。
操作方法:若菌种为冻干粉形式,按照说明书溶解后,可直接涂布或划线至2216E或3%氯化钠TSA平板上,也可加入至2216E液体培养基中;若菌种为甘油冻存管形式,从冰箱中取出速融后,涂布或划线至2216E或3%氯化钠TSA平板上,或加入至2216E液体培养基中;若菌种为瓷珠形式,挑取瓷珠可转入2216E液体培养基或平板或3%氯化钠TSA平板上,30-37℃培养1-2天。
注:部分海洋弧菌具有一定嗜冷的特性,如哈氏弧菌,在30-37℃虽然可以生长,但不能表现发光特性,需在25℃以下进行培养2-3天,可观察到明显的发光现象。
三、实验室常用保存方法
1.斜面保存法
将3%氯化钠TSA或2216E琼脂培养基制成斜面管,接种弧菌后培养至菌落生长良好,置于室温可保存1-2周。
注:一些弧菌在2-8℃会出现自溶现象,因此一般不在2-8℃保存。
2.甘油/瓷珠冷冻保存法
可挑取培养好的弧菌至弧菌专用菌种液体/瓷珠菌种保存管(通常含有3%的氯化钠)中制成约109CFU/mL的菌液(瓷珠保存法需摇匀后弃菌液保留瓷珠),置于冰箱或液氮罐中冷冻保存,在-70℃以下可保存两年以上。
注:一些弧菌生命力相对较弱,在-20℃容易死亡,因此建议进行低温冷冻保藏时,尽可能在-70℃以下保存。
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