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PPLO肉汤培养基的原理和使用方法

刘浩然
录入时间:2023-5-15 15:15:25 来源:青岛银河澳门官网入口

一、用途及试验原理

  用于支原体分离和培养的基础培养基。

  䏡胨、蛋白胨、牛肉浸粉、牛心浸粉提供氮源、维生素、氨基酸和生长因子;氯化钠可维持均衡的渗透压。


二、培养基配方(g/L)

䏡胨

1.0

蛋白胨

10.0

牛肉浸粉

1.0

牛心浸粉

4.0

氯化钠

5.0

pH值7.6-8.0(25℃)


三、试验方法

  1、称取本品21 g,加热溶解于700 mL蒸馏水中,121℃高压灭菌15分钟,冷至50℃-60℃时加入300 mL添加剂(包括200 mL马血清和100 mL除菌的新鲜酵母浸液),混匀,备用。

  新鲜酵母浸出液制备方法:取500 g鲜酵母或250 g酵母干粉,加入至1.5 L双蒸水中,搅拌均匀,充分溶解后煮沸15 min,快速冷却,4000 r/min离心15 min,取上清液,再煮沸15 min,冷却后用0.22 μm微孔滤膜过滤除菌或116℃高压灭菌20 min。

  为简化操作,可使用酵母浸粉配制的溶液替代新鲜酵母浸液,酵母浸粉溶液的配制方法为,将5 g酵母浸粉添加至100 mL蒸馏水中混匀,可替代100 mL新鲜酵母浸出液。

  2、制备质控菌株,接种至培养基中,做10倍系列稀释,稀释至10-9,并做空白对照。

  3、放置于36℃±1℃恒温培养箱中,微需氧培养7-14天。


四、试验注意事项

  1、培养肺炎支原体时,培养基需额外添加葡萄糖(为可发酵的糖);培养口腔支原体时,培养基需额外添加精氨酸(为可水解的氨基酸);进行灵敏度试验时需额外添加酚红(指示剂)。

  2、由于马血清为深黄色,培养基添加马血清后,会干扰结果判定,为解决这一问题,可将培养基的pH调至偏上限,如pH值为7.9。

  3、若使用非一次性试管等容器进行试验,容器使用前应使用蒸馏水冲洗干净,确保无洗涤液等残留物,以免增加试验的不确定性或污染。

  4、灭菌结束后,试管口会有水珠,在进行梯度稀释时,水珠很容易与空气中的细菌接触以致污染,因此,试管口应灼烧至干燥,胶塞也需过火,振荡操作后,若培养基接触到胶塞,还需再次进行灼烧操作。

  5、调节pH时,使用的酸碱试剂均应是灭菌后的。

  6、支原体培养前应使用封口膜封口,可提供微需氧环境以及降低污染的风险。


五、质控结果

  接种以下质控菌株,放置于36℃±1℃恒温培养箱中,需氧培养7~14天。肺炎支原体、口腔支原体分别培养至11、5天的试验结果分别如图1、2所示。

质控菌株

菌株编号

接种量(CFU)

生长情况

其它特征

肺炎支原体

ATCC 15531

/

+++

10-9稀释度变黄色

口腔支原体

ATCC 23714

/

+++

10-4稀释度变粉色


PPLO肉汤培养基培养肺炎支原体11天的灵敏度

图1 PPLO肉汤培养基培养肺炎支原体11天的灵敏度

PPLO肉汤培养基培养口腔支原体5天的灵敏度

图2 PPLO肉汤培养基培养口腔支原体5天的灵敏度


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注:本文属银河澳门官网入口原创,未经允许不得转载。

 

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