一、选择性分离/计数固体培养基的介绍
选择性分离/计数固体培养基常用于特定细菌的分离培养,通常添加有特定的抑制成分,减少非目标菌的生长,对目标菌的生长没有影响或影响较小,达到选择性分离的效果,大部分的选择性培养基中同时添加有特定的底物,使目标菌生长具有特定的菌落特征、颜色反应,更容易识别所需的目标菌。
二、培养基的出厂检验
1.目标菌的生长率测定(定量)
将质控菌株接种至非选择性肉汤或平板中进行活化培养,使用生理盐水或磷酸盐缓冲液进行十倍系列稀释至适宜梯度,吸取0.1mL制备好的菌悬液,分别涂布至待测培养基和参比培养基,每平板接种水平为20-200CFU,至少接种2块平板,将接种好的培养基置于标准规定的条件下进行培养。生长率PR=NS(待测平板菌落总数)/NO(参比培养基平板菌落总数,应≥100CFU),目标菌在待测培养基上应有典型的生长和菌落特征,计数培养基的生长率应不小于0.7,分离培养基的生长率一般不小于0.5,最低应在0.1以上。
2.非目标菌的特异性检验(定性)
将质控菌株接种至非选择性肉汤培养基中过夜培养,用1μL接种环挑取菌液在平板上划平行直线或分区划线,置标准规定的温度培养,非目标菌应有典型的菌落外观、大小和形态。
EMB非目标菌特异性检验-鼠伤寒沙门氏菌
3.非目标菌的抑制性检验(半定量)
用1μL接种环取选择性测试工作菌悬液1环, 在待测培养基表面划六条平行直线,同时接种两个平板,按标准规定的条件进行培养,培养后计算生长指数G,每条有比较稠密菌落生长的划线则G为1,如果仅一半的线有稠密菌落生长,则G为0.5。如果划线上没有菌落生长、生长量少于划线的一半或菌落生长微弱,则G为0,记录每个平板的得分总和便得到G。非目标菌的G值一般小于或等于1,至少应达到G<5。
EMB非目标菌抑制性检验-金黄色葡萄球菌(G≤1)
三、培养基的验收方法
1.目标菌的半定量测试
将质控菌株接种至非选择性肉汤培养基中过夜培养制成工作菌悬液,使用1μL接种环挑取1环菌液,按照标准的方法连续划16线,置于标准规定的温度培养,如果仅一半的线有稠密菌落生长,则G为0.5。如果划线上没有菌落生长、生长量少于划线的一半或菌落生长微弱,则G为0,计算G值总和,应达到G≥6。
EMB目标菌半定量测试-大肠杆菌(G≥6)
2.非目标菌的特异性、选择性测试方法与出厂检验方法完全相同。
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