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配制培养基时的注意事项以及常见问题分析

纪旭艳
录入时间:2023-3-17 16:10:46 来源:青岛银河澳门官网入口

一、配制培养基时的注意事项

  1.培养基在灭菌前,需进行加热溶解(含琼脂的培养基需煮沸4-6次至琼脂完全溶解),再进行分装灭菌(应不超过1000mL);

  2.含琼脂培养基,若灭菌前未进行加热溶解,灭菌后需充分摇匀使用;

  3.所有培养基不宜灭菌过度和长时间保温,特别是含糖量高的培养基,如沙氏葡萄糖琼脂,灭菌过度或保温时间过长易使葡萄糖发生焦化,灭菌后的培养基颜色会变深,pH会下降,此外还会使蛋白胨中的维生素分解,降低培养基的营养;

  4.需另加添加剂的培养基通常在培养基冷却至50℃左右时加入,已加入添加剂的琼脂类培养基不可熔化再次使用;

  5.配制好的培养基需及时灭菌,不可久置;

  6.培养基不可重复灭菌;

  7.琼脂培养基不可反复熔化使用;待用的琼脂培养基可置47-50℃水浴保温或50-60℃烘箱保温,一般不可超过4小时。

  8.使用蒸馏水或纯化水配制。饮用水或自来水中由于含矿物盐离子,配制培养基会产生浑浊现象。

  9.容器不易过满,容量至少应比培养基体积大20%。


二、配制过程中的常见问题分析

  1、培养基颜色不正确

  (1)含有酸碱指示剂的培养基,若颜色不正确,通常是由于pH不正确导致的,加热过度、错误的灭菌方式等都会导致此项问题。

  (2)加热过度导致某些成分分解或糖焦化,如SC培养基加热过度会变红,含糖量高的培养基,加热过度通常会出现颜色加深,呈焦糖色或棕褐色。

  (3)某些成分变质,如血液久置易变黑,制成的平板颜色偏棕黑色。


  2、培养基不凝固或凝固性差

  (1)称量错误

  (2)琼脂分布不均匀

  (3)培养基pH不正确

  (4)加热过度

  (5)琼脂量不足

灭菌前未加热溶解,灭菌后未充分摇匀,

会出现分层现象,琼脂凝固在底层,上层不凝固

  3、培养基产生沉淀

  (1)某些培养基原本就含有不溶性沉淀,如TTB,MC培养基等,配方中含有大量不溶性碳酸钙。

  (2)灭菌前未充分溶解,如Fraser培养基中含有大量磷酸盐,若灭菌前溶解不充足,灭菌后就会出现大量沉淀。

  (3)pH不正确,偏酸或偏碱都有可能使培养基中的部分金属离子产生沉淀。

  (4)水的纯度不够,天然水中含有较多的矿物盐离子,若未除净,则易与培养基中的磷酸盐反应生成沉淀。

  (5)添加剂加入温度不正确,卵黄、血液等对温度敏感的添加成分,若加入时温度过高或温差过大,易出现凝块。

  (6)称量错误。

  (7)试剂加入顺序不正确。

  4、培养基污染

  (1)灭菌方式不正确,导致灭菌不彻底

  (2)灭菌锅的灭菌效力不达标

  (3)灭菌量过多,灭菌前未加热溶解

  (4)培养基本身含耐热菌较多

  (5)灭菌过程中,灭菌锅内冷空气未排干净

  (6)灭菌锅放置过满

  (7)操作过程发生污染

  (8)分装培养基器皿灭菌不充分

  (9)滤膜破损

 

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