1 检验程序
婴幼儿配方奶粉中嗜热菌的检验程序见图1。
图1 嗜热菌的检验程序
2 操作步骤
2.1 样品的稀释
2.1.1 称取25g样品置于盛有225mL无菌磷酸盐缓冲液或无菌生理盐水的无菌均质杯内，8000r/min～10000r/min均质1min～2min，或放入盛有225mL稀释液的无菌均质袋中，用拍击式均质器拍打1min～2min，制成1:10的样品匀液。
2.1.2 用1mL无菌吸管或微量移液器吸取1:10样品匀液1mL，沿管壁缓慢注于盛有9mL稀释液的无菌试管中（注意吸管或吸头尖端不要触及稀释液面），振摇试管或换用1支无菌吸管或吸头反复吹打使其混合均匀，制成1:100的样品匀液。
2.1.3 按2.1.2操作，制备10倍系列稀释样品匀液。每递增稀释一次，换用1次1mL无菌吸管或吸头。
2.1.4 根据对样品污染状况的估计，选择2个～3个适宜稀释度的样品匀液，在进行10倍递增稀释时，吸取1mL样品匀液于无菌培养皿内，每个稀释度做两个培养皿。同时，分别吸取1mL空白稀释液加入两个无菌培养皿内作空白对照。
2.1.5及时将15mL～20mL冷却至46℃～50℃的MPC培养基（可放置于48℃±2℃恒温装置中保温）倾注培养皿，并转动培养皿使其混合均匀。
2.2 培养
水平放置待琼脂凝固后，将平板翻转，55℃±1℃培养48h ± 2h，培养过程中注意防止平板干裂。
2.3 菌落计数
2.3.1 可用肉眼观察，必要时用放大镜或菌落计数器,记录稀释倍数和相应的菌落数量。菌落计数以菌落形成单位(colony forming unit，CFU)表示。
2.3.2 选取菌落数在30CFU～300CFU之间、无蔓延菌落生长的平板计嗜热菌数。低于30CFU的平板记录具体菌落数，大于300CFU的可记录为多不可计。
3 嗜热菌的计算方法
3.1 若只有一个稀释度平板上的菌落数在适宜计数范围内，计算两个平板菌落数的平均值，再将平均值乘以相应稀释倍数，作为每g样品中嗜热菌结果。
3.2 若有两个连续稀释度的平板菌落数在适宜计数范围内时，按式（1）计算：
式中:
N ——样品中嗜落菌菌落数；
ΣC——平板(含适宜范围菌落数的平板)菌落数之和；
n1——第一稀释度(低稀释倍数)平板个数；
n2——第二稀释度(高稀释倍数)平板个数；
d ——稀释因子(第一稀释度)。
3.3 若所有稀释度的平板上菌落数均大于300CFU，则对稀释度最高的平板进行计数，其他平板可记录为多不可计，结果按平均嗜落菌菌落数乘以最高稀释倍数计算。
3.4 若所有稀释度的平板菌落数均小于30CFU，则应按稀释度最低的平均嗜落菌菌落数乘以稀释倍数计算。
3.5 若所有稀释度平板均无菌落生长，则以小于1乘以最低稀释倍数计算。
3.6 若所有稀释度的平板菌落数均不在30CFU～300CFU之间，其中一部分小于30CFU或大于300CFU时，则以最接近30CFU或300CFU的平均菌落数乘以稀释倍数计算。
4 结果报告
4.1 菌落数小于100CFU时，按“四舍五入”原则修约，以整数报告。
4.2 菌落数大于或等于100CFU时，第3位数字采用“四舍五入”原则修约后，采用两位有效数字，后面用0代替位数；也可用10的指数形式来表示，按“四舍五入”原则修约后，采用两位有效数字。
4.3 若空白对照上有菌落生长，则此次检验结果无效。
4.4 以CFU/g为单位报告。
附录A培养基和试剂
A.1 含0.1%脱脂奶粉的平板计数琼脂(MPC)培养基 点击查看
A.1.1 成分
胰蛋白胨
5.0g
酵母浸膏
2.5g
葡萄糖
1.0g
脱脂奶粉
1.0g
琼脂
10.0g～15.0g
蒸馏水
1000mL
A.1.2 制法
将上述成分加于蒸馏水中，煮沸溶解，调节pH至7.0±0.2。分装试管或锥形瓶，121℃高压灭菌15min。
注1:脱脂奶粉不应含有抗生素类物质。
注2:琼脂用量根据其凝固程度决定。
A.2 无菌磷酸盐缓冲液 点击查看
A.2.1 成分
A.2.2 制法
磷酸二氢钾(KH2PO4)
34.0g
蒸馏水
500mL
贮存液：称取34.0 g的磷酸二氢钾溶于500mL蒸馏水中，用大约175mL的1mol/L氢氧化钠溶液调节pH至7.2，用蒸馏水稀释至1000 mL后贮存于冰箱。
稀释液：取贮存液1.25mL，用蒸馏水稀释至1000mL，分装于适宜容器中，121℃高压灭菌15min。
A.3 无菌生理盐水 点击查看
A.3.1 成分
A.3.2 制法
氯化钠
8.5g
蒸馏水
1000mL
称取8.5g氯化钠溶于1000mL蒸馏水中，121℃高压灭菌15min。
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