获得的营养缺陷型菌株还应进一步确认其生长的所需物。菌株较少时，可用生长谱法，若菌株较多时，常采用组合补充培养基法。

1、生长谱法

将待测菌接到斜面扩增培养，经离心洗涤除去细胞外吸附的营养物质，再涂布在基本培养基平板，每块平板涂布10⁵个以上的细胞。也可将待测菌与融化的固体基本培养基混合均匀后倒入培养皿，待培养基凝固后，在平板上分区域放置少量不同的营养物或蘸有不同营养物的无菌滤纸片并保温培养。从每种营养物区域内该菌的生长情况，判断对营养的需求。

测定一般应分两阶段。第一阶段应确定是哪类物质的缺陷型。将滤纸分别蘸取酪素水解液(氨基酸混合液)、水溶性维生素、核酸水解液和酵母浸出汁，等距离地放入平板中。这样形成生长谱以及由此确定营养缺陷型类别。酪素水解液、水溶性维生素、核酸水解液分别对应于氨基酸缺陷型、维生素缺陷型和碱基缺陷型。无论哪种类型的营养缺陷型都能在酵母浸出汁周围生长。

第二阶段应根据第一阶段确定的范围，再进一步确定是哪种具体化合物的缺陷型。如果第一阶段确定是氨基酸缺陷型，那就需要确定是哪一种氨基酸缺陷型。

如果不是有针对性地筛选某几种营养物的缺陷型，那需要做较多的测定，可采用组合营养物法。如已确定是15种营养物质中某一物质的缺陷型，可以将15种物质分成5组 (也可将21 种物质分6 组)。以五张滤纸分别蘸取该5个组合的混合物放在涂布受检菌的基本培养基平板上，培养后观察可发现组合营养物各种生长谱的可能形式。根据生长谱和营养物组合可以判断菌株的营养缺陷型。

2、组合补充培养基法

若待测菌株较多，则可按上述的营养物质组合，将它们直接添加在培养基中，组成5组补充培养基，将待测的菌点种在各种补充培养基上，逐个分析各菌的缺陷类型。

也可以根据需要，配制一组补充培养基，每一种补充培养基中只缺一种营养物。那么，所有的营养缺陷型都可用它一次性检测，尤其是对于多种营养物质的营养缺陷型。

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