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ONPG生化管原理和使用方法

丁鑫鑫
录入时间:2023-1-6 10:38:27 来源:青岛银河澳门官网入口

一、试验用途及原理:

  用于沙门氏菌和志贺氏菌、霍乱弧菌生化鉴定。

  细菌分解乳糖依靠两种酶的作用,一种是β-半乳糖苷酶渗透酶,它位于细胞膜上,可送乳糖分子渗入细胞,另一种β-半乳糖苷酶,亦称乳糖酶,位于细胞内,能使乳糖水解成半乳糖和葡萄糖。

  具有上述两种酶的细菌,能在24-48h发酵乳糖,而缺乏此两种酶的细菌,不能分解乳糖。乳糖迟缓发酵菌只有β-半乳糖苷酶而缺乏β-半乳糖苷渗透酶,因而乳糖进入细胞很慢,需经培养基中1%乳糖较长时间的诱导,产生相当数量的渗透酶后,才能较快分解乳糖,故呈迟缓发酵现象。

  ONPG可迅速进入细菌细胞,被β-半乳糖苷酶水解,释放出黄色的临位硝基苯酚,故由培养液变黄可迅速测知β-半乳糖苷酶的存在,从而确定该菌为乳糖迟缓发酵菌。


二、培养基配方(g/L):

1%蛋白胨水

750mL

ONPG

1.5g

磷酸盐缓冲液

250mL

pH 7.5 25℃


三、试验方法:

  1. 将标准储备菌株接种到非选择性肉汤中或采用其他制备方法,制成5 McFarland浊度(约109CFU/ml)的菌悬液。

  2. 吸取0.05-0.08ml(约1-2滴)至生化管内,36±1℃培养24h后,观察实验结果。


四、结果观察与解释

接种以下质控菌株,36±1℃培养24h:

质控菌株

菌株编号

生长情况

其他特征

大肠埃希氏菌

ATCC25922

+++

阳性,培养基变深黄色

霍乱弧菌

/

+++

阳性,培养基变深黄色

福氏志贺氏菌

CMCC(B)51572

+++

阴性,培养基无色

宋内志贺氏菌

CMCC51592

+++

阳性,培养基变深黄色

痢疾志贺氏菌

CMCC51252

+++

阴性,培养基无色

肺炎克雷伯氏菌

CMCC46117

+++

阳性,培养基变深黄色

伤寒沙门氏菌

CMCC(B)50071

+++

阴性,培养基无色


ONPG生化管质控结果

图1-1 ONPG生化管质控结果


五、注意事项

  本培养基仅为细菌鉴定的一部分,需做其他补充试验。


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注:本文属银河澳门官网入口原创,未经允许不得转载。

 

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