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李氏菌增菌肉汤(LB1,LB2)基础原理及使用方法

纪英姿
录入时间:2022-7-14 16:01:43 来源:青岛银河澳门官网入口

一、用途:

  添加萘啶酮酸,吖啶黄素即为LB1,LB2,用于李斯特氏菌二步增菌(GB4789.28-2013,GB 4789.30-2016)。


二、实验原理:

  胰胨、多价胨和酵母膏提供氮源、维生素和生长因子;李斯特氏菌可耐受较高含量的氯化钠;磷酸二氢钾和磷酸氢二钠为缓冲剂;七叶苷为可发酵的糖类;萘啶酮酸和吖啶黄为选择性抑菌剂,抑制非李斯特氏菌的生长。


三、培养基配方(g/L):

胰胨

5.0

多价胨

5.0

酵母膏

5.0

氯化钠

20.0

磷酸氢二钾

12.0

磷酸二氢钾

1.4

七叶苷

1.0

pH 7.3±0.1 25℃

此配方可以进行改良或增加营养成分以获得最佳的结果


四、试验方法:

  1、称取本品49.4g, 加热搅拌溶解于 1000ml蒸馏水中,分装, 121℃高压灭菌15分钟,备用。

    LB1液:每225ml培养基中加入1支萘啶酮酸(5.0mg/支)和1支吖啶黄素(3.0mg/支);

    LB2液:每200ml培养基中加入1支萘啶酮酸(4.0mg/支)和1支吖啶黄素(5.0mg/支)。

  2、制备质控菌液。

  3、混合菌的接种

  在装有待测培养基的试管中接种10-100CFU的目标菌,并接种1000-5000CFU的非目标菌,接种总量1ml,同时接种两个平行管,混匀。同时分别将目标菌菌悬液(与试管接种同一稀释度)和非目标菌菌悬液(比试管接种小10-100倍稀释度)1ml倾注平板,接种两个平板,作接种量计数用,30±1℃培养18-24小时。

  4、非目标菌接种

  在装有待测培养基的试管中接种1000-5000CFU的非目标菌,接种量1ml,同时接种两个平行管,混匀,30±1℃培养18-24小时。

  5、培养液的接种

  5.1混合菌培养液的接种

  用10μL接种环取1环经培养后的混合菌培养液,换线接种到PALCAM上,每管接种一个平板,36±1℃培养24-48小时。

  5.2非目标菌培养液的接种

  吸取10μL经培养后的非目标菌培养液,均匀涂布接种到TSA上,每管接种一个平板。也可使用倾注法进行接种,36±1℃培养18-24小时。

  6、记录实验结果

  目标菌在选择性平板上的菌落应>10CFU,则表示待测液提培养基的生长率良好;非目标菌在非选择性平板上的菌落<100CFU,则表示待测液体培养基的选择性为良好。


五、结果观察与解释:

  接种以下质控菌株,在30±1℃培养18-24小时:

质控菌株

菌株编号

接种量

(CFU)

方法

质控结果

其他特征

单增李斯特氏菌

大肠埃希氏菌

粪肠球菌

ATCC19115

ATCC25922

ATCC29212

10-100

1000-5000

1000-5000

半定量

在PALCAM上>10CFU

灰色至黑色菌落,带有黑色晕环

大肠埃希氏菌

ATCC25922

1000-5000

在TSA上<100CFU

/

粪肠球菌

ATCC29212

1000-5000

在TSA上<100CFU

/


图1-2 李氏菌增菌肉汤(LB2)微生物质控结果

备注:a:单增李斯特氏菌,b:大肠埃希氏菌,c:粪肠球菌,d:空白对照

六、注意事项:

  本培养基仅为细菌鉴定的一部分,需做其他补充试验。


相关产品:

李氏菌增菌肉汤(LB1,LB2)基础-点击查看产品详情


相关标准:

GB 4789.30-2016 单核细胞增生李斯特氏菌检验 点击下载


GB 4789.28-2013 培养基和试剂的质量要求 点击下载


注:本文属银河澳门官网入口原创,未经允许不得转载。

 

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