【原理】

  家兔是最常用的制备各种病原微生物(细菌、病毒、立克次体、螺旋体、支原体、衣原体、真菌等)抗血清的实验动物,以某种微生物体或其抗原成分作为免疫原免疫家兔即可得到该种微生物的抗血清,从这种抗血清中提取免疫球蛋白即为抗该种微生物的抗体制剂。原则上,每种微生物都可从家兔免疫制得各自的抗体制剂.所有这些抗体制剂,除免疫球蛋白的可变区—抗原结合位点不同外,其余部分的分子结构都是相同的,因而具有共同的抗原性,因此都可以和抗兔(通常以山羊或绵羊制备,简称羊抗兔,如以马制备,则称马抗兔)荧光抗体结合,从而间接显示某种抗微生物抗体与对应微生物体或其抗原的结合。这里,兔抗微生物抗体称为第1抗体,而荧光标记的抗兔免疫球蛋白抗体则称为第2抗体。

【制法】

  (1)提取正常健康雄性成年家兔免疫球蛋白(IgG)作免疫原;

  (2)以上述家兔免疫球蛋白免疫羊或其它适宜动物,制取抗兔免疫球蛋白G的抗血清;

  (3)从以上抗血清中提取IgG;

  (4)以荧光素标记提取的IgG,并纯化签定,确定染色效价的工作浓度。

【用途】

  主要用作荧光抗体间接染色法以检测未知抗原,用以作传染病的快速诊断或菌毒种的血清学鉴定。在家兔免疫过程中,也可用已知免疫原(如微生物体或病毒感染细胞)作底物检测抗体效价或滴度消长变化。

【注意事项】

  1.以间接染色法检测微生物体或其抗原成分时,第1抗体的稀释度必须适当,太浓易发生抗体密度过大,产生空间位障,使第2抗体反而不易结合;过稀则不能结合足够量的第2抗体。这两种情况都会使荧光强度减弱,并降低敏感性。

  2.标记抗体的F/P克分子比不得超过2,否则易产生非特异染色,使结果判断的准确性降低。

  3.为了准确确定第1抗体的合适稀释度,最好用标准抗原作“方阵法”染色滴定。

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