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沙门氏菌检验用增菌培养基的选择与应用

许英俊
录入时间:2022-4-18 14:40:07 来源:青岛银河澳门官网入口

 一、沙门氏菌简介:

  《Bergey’s鉴定细菌学手册》第9版(1994)对沙门氏菌的描述为:沙门菌为G-直杆菌,大小(0.7-1.5)μm×(2.0-5.0)μm,菌落直径2mm-4mm。通常具有周鞭毛,能运动,兼性厌氧,最适培养温度37℃,发酵D-葡萄糖及其他糖类产酸,通常产气,氧化酶阴性,触酶阳性,靛基质和V-P试验阴性,甲基红(MR)试验及西蒙枸橼酸盐阳性,赖氨酸和鸟氨脱羧阳性,精氨酸双水解酶反应不定。产生H2S,不水解尿素,氰化钾培养基生长和利用丙二酸盐不定,能还原硝酸盐,通常发酵L-阿拉伯糖、麦芽糖、D-甘露醇、D-甘露糖、L-鼠犁糖、D-山犁糖和D-木糖。

  沙门氏菌属食物中毒是一种常见的细菌性食物中毒,原因主要是食品被沙门氏菌污染、繁殖,再加上处理不当,未能杀死沙门氏菌。在加工被污染的猪肉及内脏时,常因加热不够或切块太大,食品中心部分仍有存活的细菌,食后可致中毒。另外,在患病的牛乳中,如加热不彻底也可中毒。

  沙门氏菌食物中毒主要有三种表现类型,即胃肠型、伤寒型、败血症型。以胃肠型最为常见。前期症状有寒战、头痛、头晕、恶心与痉挛性腹痛,继之出现呕吐、腹泻、全身酸痛或发热,每天腹泻可达7~8次,体温在38℃~40℃之间,病程约3~5天,一般2~3天腹泻停止,体温恢复正常,一般情况好转。严重者,特别是儿童,老年人和体弱者常因脱水、酸中毒、无尿、心力衰竭等,会因急救不及时而危及生命。

  鉴于以上所述的沙门氏菌的危害性,所以在食品检验中,需非常重视沙门氏菌的检验。能否用最有效的方法,对样品中的沙门氏进行检出,尤其重要。但由于沙门氏菌种类繁多,按照考夫曼·怀特的分类,已确认的沙门氏菌属有2000多个血清型,根据沙门氏菌抗原结构的不同,可分为A、B、C、D、E等34个组,其中主要有猪霍乱沙门氏菌、鼠伤寒沙门氏菌、肠类沙门氏菌、鸡沙门氏菌、鸭沙门氏菌等10多个血清型。

  如此庞杂的沙门氏菌家族,只用一种培养基进行增菌,很难将样品中所含的所有沙门氏菌一个不差地培养出来,所以很多标准规定采用两种培养基进行增菌。


二、标准要求的培养基:

  《GB4789.4 食品安全国家标准  食品微生物学检验  沙门氏菌检验》中规定对沙门氏菌的增菌采用四硫磺酸盐煌绿增菌液(TTB)和亚硒酸盐胱氨酸增菌液(SC)培养基。其检验流程如图1:

图1  沙门氏菌检验程序


三、培养基比较:

  两种培养基的比较如表1

表1 四硫磺酸盐煌绿增菌液(TTB)和亚硒酸盐胱氨酸增菌液(SC)培养基的比较

比较项目

培养基

TTB

SC

基础成分

蛋白胨、牛肉粉、氯化钠、碳酸钙

蛋白胨、乳糖、磷酸氢二钠、L-胱氨酸

抑菌剂

胆盐、硫代硫酸钠、

四硫磺酸钠、煌绿

亚硒酸氢钠

抑菌性

灭菌方式

高压蒸汽灭菌

加热煮沸灭菌、迅速冷却

pH值

7.0±0.1

7.0±0.1

培养温度

42℃±1℃

36℃±1℃

培养时间

18h-24h

18h-24h

  从表中可以明显看出,两种培养基除了一些基本的营养成分外,最大的区别就是抑菌剂的选择不同。TTB中选用了胆盐、硫代硫酸钠、四硫磺酸钠(四硫磺酸钠是在培养基加入碘液时形成)和煌绿作为抑菌剂,抑菌能力较强;而SC则选用了较单一的亚硒酸氢钠作为抑菌剂。

  两者的差别还在于以下几点,使用时需要特别注意:

  1、抑菌剂的添加方式不同,TTB中胆盐和硫代硫酸钠直接添加到干粉中,可进行高压灭菌,但碘液和煌绿则是配成溶液的形式,需要将基础灭菌后,使用前临时加入培养基中,不宜久置;而SC中的亚硒酸氢钠是直接加到干粉中去的,可以与其它成分一起进行灭菌。

  2、两种培养基灭菌方式不同,TTB基础可高压灭菌,SC只能轻微煮沸(即刚开始沸腾就撤离加热源)的方式,且要迅速用凉水冷却,以免颜色发生变化,影响使用效果。

  3、两种培养基的培养温度不同,TTB需要在42℃±1℃条件下进行培养,而SC需要在36℃±1℃条件培养。

  4、不同种类的沙门氏菌在这两种培养基中的生长情况如图2

图2  不同类型的沙门氏菌在TTB和SC培养基中的生长情况


四、讨论:

  经常有人问,为什么一定要用两种培养基进行增菌,这两种培养基增菌后的液体怎么划线,有没有什么选择取舍之类的做法?答案是否定的。首先,我们之所以选择两种培养基进行增菌,其目的就是为了将样品中的沙门氏菌尽量多地培养出来,关于接菌,标准(《GB4789.4 食品安全国家标准  食品微生物学检验  沙门氏菌检验》)中有明确描述:“轻轻摇动培养过的样品混合物,移取1mL,转种于10mLTTB内,于42℃±1℃培养18 h~24h。同时,另取1mL转种于10mLSC内,于36℃±1℃培养18h~24h。”在这一过程中,两种培养基本来就是互相补充,既然已经培养出来,肯定是要都进行划线分离检验的。

  也就是说,TTB增菌液分别在标准中列出的BS和XLD上划线,SC增菌液也要分别在BS和XLD上划线, 最后两种增菌液中划线检出的可疑菌株都要进行下一步检验。

  同样的情况还有,有的标准中要求使用RV肉汤和SC培养基进行增菌,也要遵循这种做法,不能只选用一种增菌液进行划线。



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相关标准:

GB 4789.4-2016 沙门氏菌检验 点击下载


注:本文属银河澳门官网入口原创,未经允许不得转载。

 

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