【原理】
军团菌(Legionella)的分离培养需满足它对多种营养物质的需要以及严格的pH条件。对军团菌的生理研究表明,为保证该菌的正常生长和繁殖需要有20种氨基酸,半胱氨酸是重要氨基酸之一。B族维生素及铁是不可缺的成分,α酮戊二酸有刺激生长的作用。
本改进培养基的基础营养为酵母提取物及半胱氨酸,以复合维生素B及右旋糖酐铁满足对生长因子及铁元素的需要,添加α酮戊二酸为生长刺激剂。用过滤法除菌防止产生毒性物质,并有效保持pH值的准确,因而该菌在此培养基中生长繁殖快。
【成分】
甲液:
酵母提取物
2.00g
L 半胱氨酸
0.08g
α酮戊二酸
0.20g
右旋糖酐铁
0.80g
复合维生素B溶液
2.00ml
蒸馏水
1000ml
pH
6.9±0.05
琼脂
3.0g
蒸馏水
1000ml
【制法】
(1)甲液全部成分按量溶于水中,用KOH溶液调整至pH6.9±0.05, pH测定应使用灵敏度不低于0.05的器材因军团菌对Na+敏感,配制时最好用去离子水;
(2)配制后先用滤纸去一般不溶物,再用G6滤器除菌(如过滤困难亦可先经G5过滤)。除菌滤液按需定量分装,冰箱保存备用;
(3)乙液用去离子水(pH应接近中性)配制,琼脂含量可视情选定,121℃灭菌15分钟备用。乙液的分装量应与甲液对等、但容器需有2倍容积;
(4)使用时将乙液融化,同时将甲液保温到55~60℃,待乙液降温到55℃左右时,与甲液等量混合倾注平皿,制成平板分离培养基。
【用途】
主要用于军团菌的增殖和分离培养。
【注意事项】
α-YE使用效果良好,材料易得,无需加缓冲剂可保pH准确。因不含活性碳便于观察产生褐色素反应及作氧化酶试验。甲液成分半量配制可作液冻培基用于增菌培养。α-YE加入抗生素亦可制成选择性培基。
(天津医学院微生物学教研室 陈恩临供稿 全章由第二军医大学 谢正旸审编)
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