一、试验原理:
用于金黄色葡萄球菌的选择性增菌培养。
蛋白胨和牛肉浸粉提供碳源、氮源、维生素和矿物质;较高浓度的氯化钠提供较高的渗透压,抑制大多数非葡萄球菌的微生物。
二、培养基配方(g/L):
蛋白胨 |
10.0 |
牛肉浸粉 |
5.0 |
氯化钠 |
75.0 |
pH 7.4±0.1 25℃ |
三、试验方法:
1、培养基制备:称取本品90.0g, 加热溶解于1000ml蒸馏水中,分装三角瓶或试管,121℃高压灭菌15分钟,备用。制备好的液态培养基保存于2-8℃,应避免光线直接照射。干燥培养基应放置于阴暗干燥处,室温保存。
2、制备质控菌液。
3、接种
3.1混合菌的接种
在装有待测培养基的试管中接种10-100CFU的目标菌,并接种1000-5000CFU的非目标菌,接种总量1ml,同时接种两个平行管,混匀。同时分别将目标菌菌悬液(与试管接种同一稀释度)和非目标菌菌悬液(比试管接种小10-100倍稀释度)1ml倾注平板,接种两个平板,作接种量计数用,36±1℃培养18-24小时。
3.2非目标菌接种
在装有待测培养基的试管中接种1000-5000CFU的非目标菌,接种量1ml,同时接种两个平行管,混匀,36±1℃培养18-24小时。
4、培养液的接种
4.1混合菌培养液的接种
用10μL接种环取1环经培养后的混合菌培养液,换线接种到Barid-Parker上,每管接种一个平板,36±1℃培养45-48小时。
4.2非目标菌培养液的接种
吸取10μL经培养后的非目标菌培养液,均匀涂布接种到TSA上,每管接种一个平板。也可使用倾注法进行接种,36±1℃培养18-24小时。
5、记录实验结果
目标菌在选择性平板上的菌落应>10CFU,则表示待测液提培养基的生长率良好;非目标菌在非选择性平板上的菌落<100CFU,则表示待测液体培养基的选择性为良好。
四、结果观察与解释
接种以下质控菌株,放置36±1℃需氧培养18-24小时:
质控菌株 |
菌株编号 |
接种量(CFU) |
方法 |
质控结果 |
其他特征 |
金黄色葡萄球菌 大肠埃希氏菌 |
ATCC6538 ATCC25922 |
10-100 1000-5000 |
半定量 |
在Barid-Parker上 >10CFU |
菌落黑色凸起,周围 浑浊带,外层透明圈 |
金黄色葡萄球菌 大肠埃希氏菌 |
ATCC25923 ATCC25922 |
10-100 1000-5000 |
在Barid-Parker上 >10CFU |
菌落黑色凸起,周围 浑浊带,外层透明圈 |
|
大肠埃希氏菌 |
ATCC25922 |
1000-5000 |
在TSA上<100CFU |
/ |
图1 7.5%氯化钠肉汤微生物质控结果
备注:a:金黄色葡萄球菌(ATCC25923),b:金黄色葡萄球菌(ATCC6538),c:大肠埃希氏菌,d:空白
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