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甲烷细菌培养基



录入时间:2022-1-7 14:37:07 来源:现代微生物培养基和试剂手册

【原理】

  甲烷细菌是一类严格厌氧细菌。其可利用CO2,和H2,或乙酸、甲醇等作碳源和能源,可利用无机铵盐作氮源,还需要若干微量元素等。据此,配制本培养基时要将培养基中氧气排除,并将甲烷细菌的这些营养成分分装在无氧试管中,灭菌后用。


【成分】

a.液磷酸氢二钾
348mg
磷酸二氢钾
227mg
氯化铵
500mg
硫酸镁
500mg
硫酸铁(FeSO4·7H20)
2mg
氯化钙(CaCl2·2H20)
250mg
H2/CO2(80/20)0.2Pa 0.2Pa(20℃)
乙酸钠
100mmol
甲醇
200mmol
三甲氨
100mmol
琼脂(液体培养基不加)
20g
氯化钠
2.25g
刃天青
1mg
碳酸氢钠
850mg
蒸留水
1000ml
微量元素溶液(b液)
3ml
维生素溶液(c液)
10ml
b.半胱氨酸
300mg/L
c.Na2S.nH2O(n=7-9)
300mg/L


【制法】

  按照配方a准确秤量,磁力搅拌溶解混匀,倒入烧瓶中加热沸腾使刃青天褪色后,将烧瓶置于冰浴冷却,同时将无氧的CO2/N2(20/80)充入烧内的培养液中,排除其中剩余的氧15分钟,然后用26%NaOH溶液调至pH7.0,接着将培养液分装于无氧小试管中,每管5ml,并在试管气相部分充人H2/CO2(80/20),立即用胶塞密封,121℃灭菌30分钟备用。

  b、c液配制:先量取若干蒸馏水分别放入二只玻璃中,然后分别充入无氧N210分钟,再将预先秤好的b、c溶质分别加入玻璃中,立即用胶塞塞紧,并用铝盖固定,121℃灭菌30分钟备用。


【用途】

  分离培养和鉴定甲烷细菌。


【注意事项】

  液体培养基在使用之前,要用无菌注射器先经无氧N2冲洗,然后取一定量的b、c溶液注入培养液a中,

充分摇匀后再接种。固体滚管培养基,加热溶化后冷却至55℃左右,加入一定量的b、c溶液,充分摇匀后,立即在冰屑上迅速滚动,使培养基在管壁均匀凝固,然后用无菌接种环取少量菌体,在滚管壁培养基上划线,同时充入无氧的N2/CO2,H2/CO2(80/20),接种完毕立即塞紧胶塞培养。

(广西农学院微生物教研室 马光庭供稿)

 

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