一、用途:
用于乳酸菌的分离培养。
二、实验原理:
胰酪蛋白胨、牛酵母浸粉提供氮源、维生素、生长因子;葡萄糖提供碳源;磷酸氢二钾为缓冲剂;枸橼酸三铵、硫酸镁、硫酸锰、硫酸亚铁、吐温-80和乙酸钠为培养各种乳酸菌提供生长因子,吐温80为乳酸杆菌提供所需的代谢脂肪酸;柠檬酸铵和乙酸钠能够抑制一些杂菌的生长,包括链球菌、霉菌和除乳酸杆菌外的大多数口腔微生物菌群;加入乙酸,使pH值降低,抑制了其它细菌的生长,有利于乳酸杆菌的分离;加入碳酸钙是由于乳酸菌在培养基中产酸可以形成溶钙环,便于区分;琼脂是培养基的凝固剂。
三、培养基配方(g/L):
酵母浸粉 |
2.0 |
胰酪蛋白胨 |
10.0 |
磷酸二氢钾 |
2.0 |
牛肉浸粉 |
10.0 |
硫酸镁 |
0.2 |
葡萄糖 |
20.0 |
乙酸钠 |
5.0 |
枸橼酸三铵 |
2.0 |
硫酸锰 |
0.05 |
碳酸钙 |
5.0 |
吐温80 |
1.0 |
琼脂 |
25.0 |
pH 6.0-6.5 25℃ |
此配方可以进行改良或增加营养成分以获得最佳的结果
四、试验方法:
1、称取本品82.25g,加热溶解于 1000ml 蒸馏水中,分装三角瓶,每瓶 200ml,115℃高压灭菌 15-20min,冷至 50℃左右时,倾入无菌平皿,备用。
2、制备质控菌液。
3、用1μL接种环取非目标菌质控菌液1环,将接种环接触容器边缘3次去除多余液体,在平板表面划三区,同时接种两个平板。
4、36±1°C下培养24-48小时,记录实验结果。
五、结果观察与解释:
接种以下质控菌株,在36±1℃下培养24-48小时:
质控菌株 |
菌株编号 |
接种量(CFU) |
方法 |
质控评定标准 |
其他特征 |
嗜酸乳杆菌 |
CICC6005 |
/ |
定性 |
+++ |
白色突起菌落,有溶钙环 |
植物乳杆菌 |
ATCC8014 |
/ |
定性 |
+++ |
白色突起菌落,有溶钙环 |
图1 植物乳杆菌微生物质控结果
六、注意事项:
本培养基仅为细菌鉴定的一部分,需做其他补充试验。
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